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GB 4789.3-2016 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 大腸菌群平板計(jì)數(shù)-常見問題

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2024-08-19
核心提示: 常見問題匯總 01VRBA培養(yǎng)相關(guān)問題 1)所用器皿是否需要滅菌? 不需要。配制培養(yǎng)基所用到的錐形瓶、玻璃棒、
 常見問題匯總

 

01

VRBA培養(yǎng)相關(guān)問題

 

1)所用器皿是否需要滅菌?

 

不需要。配制培養(yǎng)基所用到的錐形瓶、玻璃棒、勺子等均不需要滅菌。但必須清洗干凈,表面無污漬、無殘留。煮沸完成后,取下錐形瓶,用一般常用的軟紙覆蓋瓶口,并橡皮筋纏繞,待冷卻至適宜溫度后,即可傾注培養(yǎng)基。在傾注培養(yǎng)基時(shí),須點(diǎn)燃酒精燈,稍微灼燒錐形瓶口。

 

2)如何保持“煮沸2min”?

 

可以用電磁爐或者電熱板進(jìn)行加熱煮沸,在該培養(yǎng)基即將煮沸時(shí)調(diào)低溫度。實(shí)際操作時(shí),不需要嚴(yán)格按照此要求進(jìn)行,加熱煮沸數(shù)秒即可。因?yàn)楸九囵B(yǎng)基很難保持煮沸2min,一旦煮沸,則培養(yǎng)基很快上涌、翻騰,若不調(diào)低問題或及時(shí)采取其它措施,則培養(yǎng)基很有可能在數(shù)秒內(nèi)噴涌出來,嚴(yán)重者可噴涌2米以上、電磁爐周圍1-2米范圍內(nèi)都是培養(yǎng)基飛濺的范圍。

 

3)若培養(yǎng)基未用完,是否可以冷藏起來下次用?

 

不可以。4789.28中已規(guī)定,固體培養(yǎng)基最多允許熔融一次,并且特指經(jīng)過高壓霉菌冷卻后的培養(yǎng)基還可以熔融一次后使用。且VRBA培養(yǎng)基冷卻后,再次熔融后非常容易噴涌,若溫度控制不當(dāng),底部培養(yǎng)基熔融后很快就會(huì)發(fā)生噴涌,即培養(yǎng)基未完全熔融就會(huì)發(fā)生噴涌現(xiàn)象。

 

4)傾注完成后是否需要“覆蓋一層"?如何覆蓋?

 

一般情況下不需要覆蓋。在實(shí)際操作過程中,若檢驗(yàn)員初次接觸該樣品類別,則因?yàn)椴淮_定是否會(huì)發(fā)生菌落蔓延,所以有必要在傾注培養(yǎng)基的時(shí)候再覆蓋一層,但如此反復(fù)多次測(cè)試后,若樣品中不存在菌落蔓延情況,則以后的檢驗(yàn)中都不需要進(jìn)行覆蓋。若重復(fù)多次測(cè)試后都有蔓延情況,則以后的檢驗(yàn)中都需要覆蓋,應(yīng)該在原培養(yǎng)基已凝固或半凝固時(shí)再傾注一層培養(yǎng)基。

 

02

如何確定培養(yǎng)基上長得是不是大腸菌群?

 

建議新手們認(rèn)真按照標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行證實(shí)實(shí)驗(yàn),此證實(shí)實(shí)驗(yàn)操作簡單,每一次VRBA上有菌落生長都進(jìn)行證實(shí)實(shí)驗(yàn),如此往復(fù)3-4次,對(duì)于哪種形態(tài)才是大腸菌群均可了然于心。

 

03

兩個(gè)梯度都漲了菌,如何選取?

 

選取15-150CFU之間的平板,挑選可疑菌落進(jìn)行證實(shí)實(shí)驗(yàn)。舉例如下:

 

若兩個(gè)連續(xù)梯度的4個(gè)平板上都要挑取菌落進(jìn)行證實(shí)實(shí)驗(yàn),實(shí)際操作時(shí),可靈活操作,如1:10的兩個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為120、123,1:100的兩個(gè)平板的菌落數(shù)分別為16,18,嚴(yán)格來講必須至少在每個(gè)平板上分別挑取10個(gè)可疑菌落和10個(gè)典型菌落進(jìn)行證實(shí)實(shí)驗(yàn),如此需要40根GBLB肉湯管。建議使用鎳合金接種環(huán),以為VRBA上生長的菌落大部分在底層、且菌落一般比較大,被培養(yǎng)基覆蓋,傳統(tǒng)的接種環(huán)較細(xì),用以刮去上層培養(yǎng)基比較方便,挑取菌落也比較方便。

 

 

04
如何進(jìn)行證實(shí)實(shí)驗(yàn),菌落選取數(shù)量?

 

 

建議新手們VRBA上的所有不同形態(tài)的菌落都進(jìn)行證實(shí)實(shí)驗(yàn)。每種不同形態(tài)都挑取5-10個(gè)進(jìn)行證實(shí)實(shí)驗(yàn)(BGLB管足夠,建議多挑選幾個(gè)進(jìn)行實(shí)驗(yàn))。

 

注意:A. 每種可疑菌落挑取5個(gè),每個(gè)菌落放入1根GBLB管中;B. “產(chǎn)氣者,記為大腸菌群陽性管‘’,就要求在實(shí)驗(yàn)前必須認(rèn)真篩選BGLB管,凡產(chǎn)氣的GBLB管應(yīng)棄去不用。

 

05

結(jié)果如何計(jì)算?

 

首先,在VRBA培養(yǎng)24h后進(jìn)行計(jì)數(shù),分別計(jì)數(shù)可疑大腸菌群和典型大腸菌群的數(shù)量。假如在1:10的平板上的可疑大腸菌群有10個(gè),典型大腸菌群有6個(gè);然后進(jìn)行證實(shí)實(shí)驗(yàn),假如10個(gè)可疑大腸菌群中有3個(gè)證實(shí)為陽性,6個(gè)典型大腸菌群中有5個(gè)證實(shí)為陽性,則計(jì)算方法如下:最終大腸菌群數(shù)=經(jīng)證實(shí)的大腸菌群數(shù)=可疑大腸菌群經(jīng)證實(shí)的數(shù)量+典型大腸菌群經(jīng)證實(shí)的數(shù)量=10×(3/10)×10+6×(5/6)×10=80。

 

06

若平板上有很多菌落,最終證實(shí)全部為陰性,結(jié)果如何計(jì)算?

 

選取適宜菌落數(shù)的平板挑取菌落進(jìn)行證實(shí)試驗(yàn),若證實(shí)全部為陰性,則需要再挑取更低稀釋度的平板上的菌落,建議可疑和典型菌落分別挑取10個(gè)進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn),若第二次證實(shí)實(shí)驗(yàn)均呈陰性,以<1乘以最低稀釋度進(jìn)行計(jì)算。

編輯:songjiajie2010

 
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