1、了解血球計數(shù)板計數(shù)原理,并掌握計數(shù)方法.

    2、掌握用測微尺測定微生物大小的方法.

二、實驗原理

    顯微鏡直接計數(shù)法是將一定稀釋的菌體或孢子懸液注入血球計數(shù)板的計數(shù)室中,于顯微鏡下直接計數(shù)的一種簡便、快速、直觀的方法.因為計數(shù)板是一塊特別的載玻片.其上由四條槽構(gòu)成三個平臺;中間較寬的平臺又被一短橫槽隔成兩半,每一邊的平臺上各刻有一個方格網(wǎng),每個方格網(wǎng)共分為九個大方格,一種是一個大方格分成25個中方格,而每個中方格又分成16個小方格(見圖2—3—44);另一種是一個大方格分成16個中方格,每個中方格又分成25個小方格,無論哪種每個大方格中的小方格都是400個.每一個大方格邊長為0.1mm,所以計數(shù)室的容積為0.1mm³.計數(shù)時,通常只用5個中格內(nèi)的菌體(孢子)數(shù)即可.然后求出每個中方格的平均值,再乘上25或16,得出一個大方格中的總茵數(shù),再換算成lml菌液中的總菌數(shù).若設(shè)5個中方格中總菌數(shù)為N,菌液稀釋倍數(shù)為M,如果是25個中方格計數(shù)板,則計算方法為:

　　　　lml菌液中的總菌數(shù)=平均每個中格中菌的個數(shù)×25×104×M=50000N•M(個)

微生物細胞的大小是微生物基本的形態(tài)特征,也是分類鑒定的依據(jù)之一.微生物大小的測定,需要在顯微鏡下,借助于特殊的測量工具——測微尺,包括目鏡測微尺和鏡臺測微尺.鏡臺測微尺是中央部分刻有精確等分線的載玻片,一般是將1mm等分為100格,每格長0.01mm(即10pm).鏡臺測微尺并不直接用來測量細胞的大小,而是用于校正目鏡測微尺每格的相對長度.

三、試劑與器材

    1、材料 釀酒酵母、藤黃微球菌和大腸桿菌的染色標(biāo)本片、釀酒酵母24h馬鈴薯斜面培養(yǎng)物.

    2、實驗器材 細胞計數(shù)板、顯微鏡、蓋玻片、無菌毛細滴管、目鏡測微尺、鏡臺測微尺、載玻片、蓋玻片、顯微鏡等.

四、實驗內(nèi)容

    1、微生物直接計數(shù)法 菌懸液制備→鏡檢計數(shù)室→加樣品→顯微鏡計數(shù)→清洗血細胞計數(shù)板

    2、微生物測微技術(shù) 裝目鏡測微尺→校正→菌體大小測定

五、關(guān)鍵步驟及注意事項

    1、防止加樣空氣泡產(chǎn)生.

    2、調(diào)節(jié)顯微鏡光線的強弱適當(dāng).

六、思考題

    1、根據(jù)你的體會,說明用血細胞計數(shù)板計數(shù)的誤差主要來自哪些方面？應(yīng)如何盡量減少誤差、力求準(zhǔn)確？

    2、某單位要求知道一種干酵母粉中的活菌存活率,請設(shè)計1～2種可行的檢測方法.

    3、為什么更換不同放大倍數(shù)的目鏡或物鏡時,必須用鏡臺測微尺重新對目鏡測微尺進行校正？