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沙門氏菌常用培養(yǎng)基的配方及原理

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2016-12-23  來源:食品實(shí)驗(yàn)室服務(wù)公眾號
核心提示:1、沙門氏菌簡介 沙門氏菌病的病原體。屬腸桿菌科,革蘭氏陰性腸道桿菌。已發(fā)現(xiàn)的近一千種(或菌株)。菌體大小(0.6~0.9)(1~
1、沙門氏菌簡介

  沙門氏菌病的病原體。屬腸桿菌科,革蘭氏陰性腸道桿菌。已發(fā)現(xiàn)的近一千種(或菌株)。菌體大。0.6~0.9)×(1~3)微米無芽胞,一般無莢膜,除雞白痢沙門氏菌和雞傷寒沙門氏菌外,大多有周身鞭毛。營養(yǎng)要求不高,分離培養(yǎng)常采用腸道選擇鑒別培養(yǎng)基。生化反應(yīng)對本屬菌的鑒別具有重要參考意義。不液化明膠,不分解尿素,不產(chǎn)生吲哚,不發(fā)酵乳糖和蔗糖,能發(fā)酵葡萄糖、甘露醇、麥芽糖和衛(wèi)芽糖,大多產(chǎn)酸產(chǎn)氣,少數(shù)只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。VP試驗(yàn)陰性,有賴氨酸脫羧酶。DNA的G+C含量為50~53%。對熱抵抗力不強(qiáng),在60℃15分鐘可被殺死。在水中存活2~3周。

2、檢測流程見表1
3、培養(yǎng)基原理

微生物檢測培養(yǎng)基
 
3.1 緩沖蛋白胨水Buffered Peptone Water

用途:用于沙門氏菌、阪崎桿菌前增菌培養(yǎng)(GB2008標(biāo)準(zhǔn))
配方:(g/L)
用法:稱取本品20.0g ,加熱溶解于1000ml蒸餾水中,121℃高壓滅菌15分鐘備用。
 
3.2 四硫磺酸鹽煌綠增菌液基礎(chǔ)(TTB) Tetrathionate Broth Base
 
用途:用于沙門氏菌選擇性增菌培養(yǎng),需加入煌綠和碘液。
配方:(g/L)
用法:稱取本品93.55g,溶解于1050ml 蒸餾水中,加熱煮沸,臨用前加入 20%  碘液 20ml,0.5%  煌綠 2ml,現(xiàn)配現(xiàn)用,不宜久置。
 
3.3 亞硒酸鹽胱氨酸增菌液(SC)Selenite Cystine Broth
 
用途:用于沙門氏菌選擇性增菌培養(yǎng)(GB、SN標(biāo)準(zhǔn)) 。
配方:(g/L)
用法:稱取本品23.0克,加熱溶解于1000ml蒸餾水中,無菌操作分裝于滅菌三角瓶或試管中備用。當(dāng)天制備當(dāng)天使用,無需高壓滅菌。

3.4 亞硫酸鉍瓊脂(BS)(GB4789)
 
配方(g/L):
用法:將前三種成分加入300 ml蒸餾水(制作基礎(chǔ)液),硫酸亞鐵和磷酸氫二鈉分別加入20 ml和30 ml蒸餾水中,檸檬酸鉍銨和亞硫酸鈉分別加入另一 20 ml和30 ml蒸餾水中,瓊脂加入 600ml蒸餾水中。然后分別攪拌均勻,煮沸溶解。冷至 80 ℃左右時(shí),先將硫酸亞鐵和磷酸氫二鈉混勻,倒入基礎(chǔ)液中,混勻。將檸檬酸鉍銨和亞硫酸鈉混勻,倒入基礎(chǔ)液中,再混勻。調(diào)節(jié) pH,隨即傾入瓊脂液中,混合均勻,冷至50 ℃~55 ℃。加入煌綠溶液,充分混勻后立即傾注平皿。
注:本培養(yǎng)基不需要高壓滅菌,在制備過程中不宜過分加熱,避免降低其選擇性,貯于室溫暗處,超過48h會降低其選擇性,本培養(yǎng)基宜于當(dāng)天制備,第二天使用。
 
3.5 XLD培養(yǎng)基XyloseLysineDeso
 
用途:選擇性培養(yǎng)基,主要用于分離志賀氏菌屬,亦可用于分離沙門氏菌。
配方:(g/L)
用法:稱取本品5.7g,加熱攪拌溶解于100ml蒸餾水中,不要過分加熱,冷至 50℃左右時(shí),傾入無菌平皿,部分開蓋干燥 2h,然后蓋上,備用。無需高壓滅菌。在 24小時(shí)內(nèi)使用。
 
3.6 HE瓊脂
 
用途:用于沙門氏菌的選擇性分離培養(yǎng)(GB標(biāo)準(zhǔn))
配方:(g/L)
原理:溴麝香草酚蘭和酸性復(fù)紅為pH指示劑,發(fā)酵糖產(chǎn)酸的菌落呈紅色,不發(fā)酵糖的菌落為藍(lán)綠色。
用法:稱取本品 95.8g,加熱溶解于 1000ml 蒸餾水中, 冷至50-55℃時(shí),傾入無菌平皿,本培養(yǎng)基不需要高壓滅菌。
 
生化培養(yǎng)基。
 
3.7 三糖鐵(TSI)瓊脂Triple Sugar Iron Agar
 
用途:生化培養(yǎng)基,用于腸桿菌科細(xì)菌的生化反應(yīng)篩選(GB2008標(biāo)準(zhǔn))
配方:(g/L)
用法:稱取本品 64.5g,加熱溶解于1000ml 蒸餾水中,加熱煮沸 1分鐘,分裝于 16mm× 150mm試管,121℃高壓滅菌 15 分鐘制成斜面長 4-5cm,底部長2-3cm。
 
3.8 賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基
 
用途:用于細(xì)菌檢驗(yàn)中賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)。
配方:(g/L)
用法:除賴氨酸以外的成分加熱溶解后, 分裝每瓶100 ml,分別加入賴氨酸。L- 賴氨酸按0.5%加入, DL-賴氨酸按1 %加入。調(diào)節(jié) pH。對照培養(yǎng)基不加賴氨酸。分裝于無菌的小試管內(nèi),每管0.5 ml, 上面滴加一層液體石蠟,115 ℃高壓滅菌 10 min 。
 
3.9 尿素瓊脂(pH 7.2)
 
用途:生化培養(yǎng)基,用于細(xì)菌脲酶檢測(GB、SN標(biāo)準(zhǔn))
配方:(g/L)
用法:稱取本品 2.1g,加熱攪拌溶解于 95ml 蒸餾水中,121 ℃高壓滅菌 15 分鐘,冷至 50-55 ℃,加入無菌的 40% 尿素水 5ml, 混勻,分裝試管, 放成斜面?zhèn)溆。?本批粉末顏色呈粉紅色。
 
3.10 糖發(fā)酵管
 
配方:
制法:
①葡萄糖發(fā)酵管按上述成分配好后,調(diào)節(jié)pH。按0.5%加入葡萄糖,分裝于有一個(gè)倒置小 管的小試管內(nèi),121℃高壓滅菌 15 min 。
②其他各種糖發(fā)酵管可按上述成分配好后, 分裝每瓶100 ml,121℃高壓滅菌15 min.另將各種糖類分別配好10%溶液,同時(shí)高壓滅菌。將 5 mL糖溶液加入于100 mL培養(yǎng)基內(nèi),以無菌操作 分裝小試管。
注:蔗糖不純, 加熱后會自行水解者,應(yīng)采用過濾法除菌。
試驗(yàn)方法:從瓊脂斜面上挑取小量培養(yǎng)物接種,于36 ℃±1 ℃培養(yǎng), 一般2d~3d。遲緩反應(yīng) 需觀察14d ~30d 。
編輯:foodec007

 
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關(guān)鍵詞: 沙門氏菌 培養(yǎng)基 原理
 

 
 
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