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微生物實驗室常見20種培養(yǎng)基配方大全!

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2018-08-03
核心提示:一、糖發(fā)酵管成分:牛肉膏5g蛋白胨10g氯化鈉3g磷酸氫二鈉 2g0.2%滇麝香草酚藍溶液12mL蒸餾水1000mLPH 7.4制法1.葡萄糖發(fā)酵管按上
 一、糖發(fā)酵管

成分:

牛肉膏 5g

蛋白胨 10g

氯化鈉 3g

磷酸氫二鈉  2g

0.2%滇麝香草酚藍溶液 12mL

蒸餾水 1000mL

PH 7.4

制法

1. 葡萄糖發(fā)酵管按上述成分配好后,0.5%加入葡萄糖,分裝于有一個倒置小管的小試管內(nèi),121℃高壓滅菌15min。

2. 其他各種糖發(fā)酵管可按上述成分配好后,分裝每瓶1000 mL121℃高壓滅菌15min。另將各種糖類分別配好10%溶液,同時高壓滅菌。將5mL糖溶液加入于100 mL培養(yǎng)基內(nèi),以無菌操作分裝小試管。

注:蔗糖不純,加熱后會自行水解者,應(yīng)采用過濾法除菌。

試驗方法:從瓊脂斜面上挑取小量培養(yǎng)物接種,于36℃±1℃培養(yǎng),一般觀察23d。遲緩反應(yīng)需觀察14~30d。

 

二、乳糖膽鹽發(fā)酵管

成分:

蛋白胨 20g

豬膽鹽(或牛、羊膽鹽)5g

乳糖 10g

0.04%滇甲酚紫水溶液 25mL

蒸餾水 1000mL

制法:將蛋白胨,膽鹽及乳糖溶于水中,校正pH,加入指示劑,分裝每管10 mL,并放入一個小倒管,115℃高壓滅菌15min。

注:雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管除蒸餾水外,其他成分加倍。

 

三、5%乳糖發(fā)酵管

成分:

蛋白胨 0.2g

氯化鈉 0.5g

乳糖 5g

2%溴麝香草酚藍水溶液 1.2mL

蒸餾水 100mL

pH 7.4

制法:除乳糖以外的各成分:溶解于50mL蒸餾水內(nèi),校正pH。將乳糖溶解于另外50mL蒸餾水內(nèi),分別滅菌121  15min,將兩液混合,以無菌操作分裝于滅菌小試管內(nèi)。

注:在此培養(yǎng)基內(nèi),大部分乳糖遲緩發(fā)酵的細菌可于ld內(nèi)發(fā)酵。

 

四、緩沖葡萄糖蛋白胨水(MRVP試驗用)

成分

磷酸氫二鉀 5g

多胨 7g

葡萄糖 5g

蒸餾水 1000mL

制法:溶化后校正pH,分裝試管,每管1mL ,121℃高壓滅菌15min。

甲基紅(MR)試驗:自瓊脂斜面挑取少量培養(yǎng)物接種本培養(yǎng)基中,于36±1℃培養(yǎng)25d,哈夫尼亞菌則應(yīng)在2225℃培養(yǎng)。滴加甲基紅試劑一滴,立即觀察結(jié)果。鮮紅色為陽性,黃色為陰性,甲基紅試劑配法:10mg甲基紅溶于30mL95%乙醇中,然后加入20 mL蒸餾水。

V-P試驗:用瓊脂培養(yǎng)物接種本培養(yǎng)基中,于36±1℃培養(yǎng)24d。哈夫尼亞菌則應(yīng)在2225℃培養(yǎng)。加入6%α-萘酚-乙醇溶液0.5mL40%氫氧化鉀溶液0.2mL充分振搖試管,觀察結(jié)果陽性反應(yīng)立刻或于數(shù)分鐘內(nèi)出現(xiàn)紅色,如為陰性,應(yīng)放在36±1℃下培養(yǎng)4h再進行觀察。

 

五、營養(yǎng)明膠

成分:

蛋白胨 5g

牛肉膏 3g

明膠 120g

蒸餾水 1000mL

pH 6.8~7.0

制法:加熱溶解,校正至pH7.47.6,分裝小管,121℃高壓滅菌10min,取出后迅速冷卻,使其凝固,復(fù)查最終pH應(yīng)為6.87.0

試驗方法:用瓊脂培養(yǎng)物穿刺接種,放在2225℃培養(yǎng),每天觀察結(jié)果,記錄液化時間;蚍旁361℃培養(yǎng),每天取出,放冰箱內(nèi)30min后再觀察結(jié)果。

 

六、苯丙氨酸培養(yǎng)基

成分:

酵母浸膏 3g

DI-苯丙氨酸(或L-苯丙氨酸1g2g

磷酸氫二鈉 1g

氯化鈉 5g

瓊脂 12g

蒸餾水 1000mL

制法:加熱溶解后分裝試管,121℃高壓滅菌15min,使成斜面。

試驗方法:自瓊脂斜面上挑取大量培養(yǎng)物,移種于苯丙氨酸瓊脂,在361℃培養(yǎng)4h1824h,滴加10%三氯化鐵溶液23滴,自斜面培養(yǎng)物上流下,苯丙氨酸脫氨酶陽性者呈深綠色。

 

七、蛋白胨水(靛基質(zhì)試驗用)

成分:

蛋白胨(或胰蛋白胨)20g

氯化鈉 5g

蒸餾水 1000mL

pH7.4

制法:按上述成分配制,分裝小試管,121℃高壓滅菌15min。

靛基質(zhì)試劑

柯凡克試劑:將5g對二甲氨基苯甲醛溶解于75mL戊醇中,然后緩慢加入濃鹽酸25ml

-波試劑:將1g對二甲氨基苯甲醛溶解于95mL95%乙醇內(nèi),然后緩慢加入濃鹽酸20 ml。試驗方法:挑取小量培養(yǎng)物接種,在361℃培養(yǎng)12d,必要時可培養(yǎng)45d。加入柯凡克試劑約0.5mL,輕搖試管,陽性者于試劑層呈深紅色;或加入歐-波試劑約0.5 mL,沿管壁流下,覆蓋于培養(yǎng)液表面,陽性者于液面接觸處呈玫瑰紅色。

注:蛋白胨中應(yīng)含有豐富的色氨酸。每批蛋白胨買來后,應(yīng)先用已知菌種鑒定后方可使用。

 

八、硫酸亞鐵瓊脂(硫化氫試驗用)

成分:

牛肉膏 3g

酵母浸膏 3g

蛋白胨 10g

硫酸亞鐵 0.2g

硫代硫酸鈉 0.3g

氯化鈉 5g

瓊脂 12g

蒸餾水 1000 mL

制法:加熱溶解,校正pH,分裝試管,115℃高壓滅菌15min,取出直立候其凝固。

試驗方法:挑取瓊脂培養(yǎng)物,沿管壁穿刺,于361℃培養(yǎng)12d,觀察結(jié)果。產(chǎn)硫化氫者使培養(yǎng)基變?yōu)楹谏?/span>

注:腸桿菌科細菌測定硫化氫的產(chǎn)生,應(yīng)采用三糖鐵瓊脂或本培養(yǎng)基。

 

九、尿素瓊脂

成分:

蛋白胨 1g

氯化鈉5g葡萄糖1g

磷酸二氫鉀 2g

4%酚紅溶液 3 mL

瓊脂 20g

蒸餾水 1000 mL

20%尿素溶液 100mL

制法:將除尿素和瓊脂以外的成分配好,并校正pH,加入瓊脂,加熱溶化并分裝燒瓶。121℃高壓滅菌15min。冷至5055℃,加入經(jīng)除菌過濾的尿素溶液,尿素的最終濃度為2%,最終pH應(yīng)為7.2±0.1.分裝于滅菌試管內(nèi),放成斜面?zhèn)溆谩?/span>

試驗方法:挑取瓊脂培養(yǎng)物接種,在361℃培養(yǎng)24h,觀察結(jié)果。尿素酶陽性者由于產(chǎn)堿而使培養(yǎng)基變?yōu)榧t色。

 

十、氰化鉀(KCN)培養(yǎng)基

成分:

蛋白胨10g

氯化鈉 5g

磷酸二氫鉀 0.225g

磷酸氫二鈉 5.64g

蒸餾水 1000 mL

0.5%氰化鉀溶液 20 mL

pH 7.6

制法:將除氰化鉀以外的成分配好后分裝燒瓶,121℃高壓滅菌15min。放在冰箱內(nèi)使其充分冷卻。每100 mL培養(yǎng)基加入0.5%氰化鉀溶液2.0mL(最后濃度為110000),分裝于12mm*100mm滅菌試管,每管約4mL,立刻用滅菌橡皮塞塞緊,放在4℃冰箱內(nèi),至少可保存兩個月。同時,將不加氰化鉀的培養(yǎng)基作為對照培養(yǎng)基,分裝試管備用。

 

十一、營養(yǎng)瓊脂

成分:

蛋白胨10g

牛肉膏3g

氯化鈉5g

瓊脂1520g

蒸餾水1000mL

制法:將除瓊脂以外的各成分溶解于蒸餾水內(nèi),加入15%氫氧化鈉溶液約2mL,校正pH7.2~7.4。加入瓊脂,加熱煮沸,使瓊脂溶化分裝燒瓶,121℃高壓滅菌15min。

注:此培養(yǎng)基可供一般細菌培養(yǎng)之用,可傾注平板或制成斜面。如用于菌落計數(shù),瓊脂量為1.5%;如作成平板或斜面,則應(yīng)為2%。

 

十二、營養(yǎng)肉湯

成分:

蛋白胨 10g

牛肉膏 3g

氯化鈉 5g

蒸餾水 1000mL

pH7.4

制法:按上述成分混合,溶解后校正pH,分裝燒瓶,每瓶225 mL ,121℃高壓滅菌15min

 

十三、緩沖蛋白胨水(BP

成分:

蛋白胨 10g

氯化鈉 5g

磷酸氫二鈉 9g

磷酸二氫鉀 1.5g

蒸餾水1000mL

pH 7.2

制法:按上述成分配好后以大燒瓶裝,121℃高壓滅菌15min。臨用時無菌分裝每瓶225mL。

注:本培養(yǎng)基供沙門氏菌前增菌用。


十四、EC肉湯

成分:

胰蛋白胨 20g

3號膽鹽(或混合膽鹽)1.5g

乳糖 5g

磷酸氫二鉀 4g

磷酸二氫鉀 1.5g

氯化鈉 5g

蒸餾水 1000mL

制法:將上述成分混合,溶解后,分裝有發(fā)酵倒管的試管中,121℃高壓滅菌15min。最終pH6.9±0.2。

 

十五、四硫磺酸鈉煌綠增菌液(TTB

基礎(chǔ)培養(yǎng)基

多胨或眎胨 5g

膽鹽 1g

碳酸鈣 10g

硫代硫酸鈉 3g

蒸餾水 1000mL

碘溶液

碘 6g

碘化鉀 5g

蒸餾水 20 mL

制法:將基礎(chǔ)培養(yǎng)基的各成分加入蒸餾水中,加熱溶解,分裝每瓶100mL。分裝時應(yīng)隨時振搖,使其中的碳酸鈣混勻,121℃高壓滅菌15min備用。臨用時每100mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入碘溶液2mL,0.1%煌綠溶液1mL

 

十六、亞硒酸鹽胱氨酸增菌液(SC

成分:

蛋白胨 5g

乳糖 4g

亞硒酸氫鈉 4g

磷酸氫二鈉 5.5g

磷酸二氫鉀 4.5g

L-胱氨酸 0.01g

蒸餾水 1000mL

1% L-胱氨酸-氫氧化鈉溶液的配法:稱取L-胱氨酸0.1g或(DL-胱氨酸0.2g),加1mol/L氫氧化鈉1.5mL,使溶解,再加入蒸餾水8.5mL即成。

制法:將除亞硒酸氫鈉和L-胱氨酸以外的各成分溶解于900mL蒸餾水中,加熱煮沸,候冷備用。另將亞硒酸氫鈉溶解于100mL蒸餾水中,加熱煮沸,候冷,以無菌操作與上液混合。再加入1% L-胱氨酸-氫氧化鈉溶液1mL。

分裝于滅菌瓶中.每瓶100mL,pH應(yīng)為7.0±0.1。

 

十七、亞硫酸鉍瓊脂(BS

成分:

蛋白胨 10g

牛肉膏 5g

葡萄糖 5g

硫酸亞鐵 0.3g

磷酸氫二鈉 4g

煌綠 0.025g

檸檬酸鉍銨 2g

亞硫酸鈉 6g

瓊脂 18~20g

蒸餾水 1000mL

pH 7.5

制法:

1.將前面5種成分溶解于300mL蒸餾水中。

2將檸檬酸鉍銨和亞硫酸鈉另用50mL蒸餾水溶解。

3將瓊脂于600mL蒸餾水中煮沸溶解,冷至80℃。

4將以上三液合并,補充蒸餾水至1000mL,校正pH,加0.5%煌綠水溶液5mL,搖勻,冷至5055℃,傾注平皿。

注:此培養(yǎng)基不需高壓滅菌。制備過程不宜過分加熱,以免降低其選擇性。應(yīng)在臨用前一天制備,貯存于室溫暗處,超過48h不宜使用。

 

十八、三糖鐵瓊脂(TSI

成分:

蛋白胨 20g

牛肉膏 5g

乳糖 10g

蔗糖 10g

葡萄糖 1g

氯化鈉 5g

硫酸亞鐵銨 0.2g

硫代硫酸鈉 0.2g

瓊脂 12g

酚紅 0.025g

蒸餾水 1000 mL

pH 7.4 

制法:將除瓊脂和酚紅以外的各成分溶解于蒸餾水中,校正pH,加入瓊脂,加熱煮沸,以溶化瓊脂。加入0.2%酚紅水溶液12.5 mL,搖勻,分裝試管。裝量宜多些,以便得到較高的底層。121℃高壓滅菌15min,放置高層斜面?zhèn)溆谩?/span>

 

十九、三糖鐵瓊脂換用方法

成分:

蛋白胨15g

眎胨5g

牛肉膏 3g

酵母膏 3g

乳糖 10g

蔗糖 10g

葡萄糖 1g

氯化鈉 5g

硫酸亞鐵 0.2g

硫代硫酸鈉 0.3g

瓊脂 12g

酚紅 0.025g

蒸餾水 1000 mL

pH7.4

制法:將除瓊脂和酚紅以外的各成分溶解于蒸餾水中,校正pH,加入瓊脂,加熱煮沸,以溶化瓊脂。加入0.2%酚紅水溶液12.5 mL,搖勻,分裝試管,裝量宜多些,以便得到較高的底層。121℃高壓滅菌15min,放置高層斜面?zhèn)溆谩?/span>

 

二十、嗜鹽性試驗培養(yǎng)基

成分:

蛋白胨2g

氯化鈉 按不同量加

蒸餾水100 mL

pH7.7

制法:配制2%蛋白胨水,校正pH,共配制5瓶,每瓶100mL。每瓶分別加入不同量的氯化鈉:(1)不加;(23g;(37g;(49g;(511g。待溶解后分裝試管,121℃高壓滅菌15min。

編輯:songjiajie2010

 
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