在日常檢測(cè)中，大多數(shù)的細(xì)菌、放線菌、霉菌培養(yǎng)法均為需氧培養(yǎng)。培養(yǎng)基接種微生物后放于35 ℃~37 ℃或25℃恒溫培養(yǎng)箱(或水浴箱)中，培養(yǎng)18 h-24h或3d-5d,大多數(shù)菌能達(dá)到指數(shù)期，可以進(jìn)行計(jì)數(shù)及鑒定。需氧培養(yǎng)法按培養(yǎng)基的狀態(tài)來(lái)分，可分為三類。

一、固體培養(yǎng)法

固體培養(yǎng)法是指將微生物接種在固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)繁殖的方法，固體培養(yǎng)基包括瓊脂平板和瓊脂斜面。瓊脂平板用于菌落計(jì)數(shù)和分離菌落，瓊脂斜面用于微生物形態(tài)觀察或保藏，接種后的平板倒置(防止冷凝水滴落到生長(zhǎng)的菌體上),堆疊(一般不超過(guò)6個(gè)平皿)放于培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)皿之間和培養(yǎng)皿距離箱壁至少要25 mm,保證空氣循環(huán)，這時(shí)，對(duì)各個(gè)點(diǎn)的溫度要進(jìn)行驗(yàn)證。為防止培養(yǎng)基過(guò)分干燥，可用塑料袋松散的包一下，也可以在培養(yǎng)箱內(nèi)放一杯水防止培養(yǎng)基干癟。斜面試管放于試管架上，然后放置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。除此兩種方法屬固體培養(yǎng)法外，還有以下幾種。

(一)插片培養(yǎng)法

(1)用高壓滅菌后冷卻到50℃左右的培養(yǎng)基制備平板，凝固后用接種環(huán)挑取菌懸液劃線接種。
(2)將滅過(guò)菌的蓋玻片以450斜插入固體培養(yǎng)基中，緊靠接種物，使菌體沿蓋玻片生長(zhǎng)，置28 ℃~32 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)3d-5 d。
(3)培養(yǎng)完畢后，取出蓋玻片放在載玻片上，直接用低倍鏡觀察放線菌的自然生長(zhǎng)個(gè)體形態(tài)。也可在載玻片上滴一滴0.1%的美藍(lán)水溶液，再放上插片，用高倍鏡觀察孢子結(jié)構(gòu)。

(二)載玻片培養(yǎng)法

(1)在培養(yǎng)皿底部鋪一張圓形濾紙，濾紙上放上一根“U"形載玻片擱架，其上放一塊干凈的載玻片和兩片蓋玻片，蓋上皿蓋，外用紙包扎，高壓滅菌后，烘干備用。
(2)將經(jīng)過(guò)高壓滅菌冷卻到50 ℃左右的培養(yǎng)基，倒入另外的無(wú)菌培養(yǎng)皿中制成2mm厚的平板，凝固后用無(wú)菌刀切成1cm2的方塊，放置于載玻片上左右各一塊。
(3)瓊脂塊的四周用接種針接種上霉菌孢子，而后蓋上蓋玻片，壓緊瓊脂塊，在濾紙上加2 ml -3 ml。無(wú)菌水或20%無(wú)菌甘油，保濕培養(yǎng)，培養(yǎng)好后，可直接用低倍鏡觀察

(三)透析膜培養(yǎng)法

透析膜浸在試管中高壓滅菌后，用無(wú)菌的鑷子取出后平鋪在瓊脂平板上，在膜上用接種工具點(diǎn)接上菌種，蓋好皿蓋后，進(jìn)行培養(yǎng)。也可直接把透析膜放在液體培養(yǎng)基里浸泡后，直接鋪在平皿中，滅菌后進(jìn)行點(diǎn)種微生物，再蓋上皿蓋進(jìn)行培養(yǎng)。

(四)其他

應(yīng)用在釀造工業(yè)上的培養(yǎng)瓶培養(yǎng)，盤曲、簾子曲培養(yǎng)，厚層通風(fēng)培養(yǎng)。

二、液體培養(yǎng)法

液體培養(yǎng)法是利用液體培養(yǎng)基對(duì)微生物進(jìn)行培養(yǎng)的方法，可分為靜止培養(yǎng)法和深層培養(yǎng)法。

(一)靜止培養(yǎng)法

靜止培養(yǎng)法是指在接種后培養(yǎng)液靜止不動(dòng)進(jìn)行培養(yǎng)。一般包括試管法和三角瓶淺層培養(yǎng)法，培養(yǎng)時(shí)盛液體培養(yǎng)基的螺口瓶或螺口試管的蓋不要擰緊，松散蓋上即可，放于試管架上，然后放置于培養(yǎng)箱或水浴鍋中進(jìn)行培養(yǎng)。在靜置狀態(tài)下，三角瓶?jī)?nèi)的通氣狀況與其中的裝液量和瓶口棉塞的通氣程度對(duì)瓶?jī)?nèi)微生物的生長(zhǎng)速度和生長(zhǎng)量有很大的關(guān)系。一般情況下，接種量越大，培養(yǎng)時(shí)間越長(zhǎng)，生長(zhǎng)量越高。剛接種的時(shí)候，菌體需適應(yīng)培養(yǎng)基環(huán)境，故繁殖較慢，然后進(jìn)入快速生長(zhǎng)期，生長(zhǎng)速度呈指數(shù)增長(zhǎng)，到一定數(shù)量后，培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分消耗殆盡，次生產(chǎn)物增多，菌體生長(zhǎng)速度減緩。

(二)通氣深層培養(yǎng)法

1.振蕩(搖瓶)培養(yǎng)法

此法最早是荷蘭人A. J. Kluyver等在1933年使用，即將三角瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)液用8層紗布包住瓶口，以取代一般的棉花塞，同時(shí)降低瓶?jī)?nèi)的裝液量，把它放置于搖床上有節(jié)奏的振蕩，以該法提高液體溶氧量的目的。

該法可以對(duì)微生物進(jìn)行通氣深層培養(yǎng)，通過(guò)對(duì)細(xì)菌、酵母等單細(xì)胞微生物振蕩培養(yǎng)，可以得到均一的菌懸液，常用于菌種的選育及生化試驗(yàn)和發(fā)酵試驗(yàn)等。

振蕩培養(yǎng)的設(shè)備有恒溫?fù)u床、搖瓶機(jī)等，培養(yǎng)瓶放在里面后，進(jìn)行振蕩培養(yǎng)，瓶口用6層~8層的紗布包扎，瓶?jī)?nèi)液體不宜過(guò)多，防止濺到瓶塞上引起污染。


2.發(fā)酵罐培養(yǎng)法

可進(jìn)行較大液體量的通氣培養(yǎng)，有小型發(fā)酵罐和大型的發(fā)酵罐，小型的發(fā)酵罐一般為1L~100 L,大型的容量一般在1m3-500 m3,能夠提供培養(yǎng)微生物的營(yíng)養(yǎng)和氧氣，并且有自動(dòng)控制和記錄裝置。

三、半固體培養(yǎng)法

利用半固體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)的方法，半固體培養(yǎng)基含有一定的瓊脂(0.02%-0.3% )，使培養(yǎng)基有一定的黏度，但沒有完全固化。培養(yǎng)時(shí)，盛半固體培養(yǎng)基的試管放置于試管架上，然后置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。一般用于生化試驗(yàn)。