移液九部曲
01
移液器套柄用力下壓,需要時小幅度旋轉(zhuǎn)即可。 錯誤操作:用力敲擊吸頭。此方法會帶來吸頭損壞甚至移液器套柄磨損,從而影響其密封性。
操作之前請先選擇正確的移液器,移液器可在10~100%量程范圍內(nèi)操作,但在10%量程處操作對于移液技巧要求高,故推薦在35~100%量程范圍內(nèi)操作。
量程調(diào)節(jié):當(dāng)由小量程調(diào)節(jié)至大量程時,朝所需量程方向連貫旋轉(zhuǎn),旋轉(zhuǎn)到達(dá)超過所需量程1/3圈處再回調(diào)至所需量程。當(dāng)由大量程調(diào)節(jié)至小量程時,直接連貫旋轉(zhuǎn)至所需量程。
粘稠液體可以通過吸頭預(yù)潤濕的方式來達(dá)到精確移液,先吸入樣液,打出, 吸頭內(nèi)壁會吸附一層液體,使表面吸附達(dá)到飽和,然后再吸入樣液,最后打出液體的體積會很精確。
用同一樣品重復(fù)吸液排液二至三次,潤洗為以后每次吸液提供相同的接觸面,保證操作的一致性。對常溫樣品,吸頭潤洗有助于提高準(zhǔn)確性;但是對于高溫或低溫樣品,吸頭潤洗反而降低操作準(zhǔn)確性,請使用者特別注意。4
吸液時盡量保持垂直狀態(tài),傾斜角度不能超過20°
吸液后在液面中保持一秒鐘再將吸頭平緩移開,這對于大容量移液器或者吸取粘性樣品尤為重要。
勻速連貫移液,控制好移液速度,太快會造成噴液,液體或者氣霧沖入移液器內(nèi)部,污染活塞等部件。
先將活塞按至第一檔排液,略作停頓后按至第二檔進(jìn)行吹液。 排液四種方式:
移液器不宜長時間握在手里,不用時最好將其掛在支架上或者掛在手上晾一下。
(1)溫度:室溫低時,手溫較高,使得空氣膨脹,吸入冷溶液時往往發(fā)生誤差; (2)氣密性:tip和槍體的結(jié)合部,以及槍內(nèi)柱體之間的長期磨損,造成誤差; (3)吸速:容易造成tip內(nèi)氣泡產(chǎn)生,而且會污染槍頭; (4)試劑的揮發(fā):吸揮發(fā)性高的試劑時,蒸汽進(jìn)入槍頭,內(nèi)壓增高,結(jié)果在壓出液體時,壓力變大,而產(chǎn)生誤差; 解決辦法:反復(fù)抽吸4~5次就可改善。
(1)吸取液體時一定要緩慢平穩(wěn)地松開拇指,絕不允許突然松開,以防將溶液吸入過快而沖入取液器內(nèi)腐蝕柱塞而造成漏氣; (2)為獲得較高的精度,吸頭需預(yù)先吸取一次樣品溶液,然后再正式移液,因為,吸取血清蛋白質(zhì)溶液或有機(jī)溶劑時,吸頭內(nèi)壁會殘留一層“液膜”,造成排液量偏小而產(chǎn)生誤差; (3)濃度和粘度大的液體,會產(chǎn)生誤差,為消除其誤差的補償量,可由試驗確定,補償量可用調(diào)節(jié)旋鈕改變讀數(shù)窗的讀數(shù)來進(jìn)行設(shè)定; (4)可用分析天平稱量所取純水的重量并進(jìn)行計算的方法,來校正取液器,1mL蒸餾水20℃時重0.9982g; (5)移液器反復(fù)撞擊吸頭來上緊的方法是非常不可取的,長期操作會使內(nèi)部零件松散而損壞移液器; (6)移液器未裝吸頭時,切莫移液; (7)在設(shè)置量程時,請注意,旋轉(zhuǎn)到所需量程,數(shù)字清楚顯示在窗中,所設(shè)量程在移液器量程范圍內(nèi)不要將按鈕旋出量程,否則,會卡住機(jī)械裝置,損壞移液器。 (8)移液器嚴(yán)禁吸取有強(qiáng)揮發(fā)性、強(qiáng)腐蝕性的液體(如,濃酸、濃堿、有機(jī)物等)。 (9)嚴(yán)禁使用移液器吹打混勻液體。 (10)不要用大量程的移液器移取小體積的液體,以免影響準(zhǔn)確度。同時,如果需要移取量程范圍以外較大量的液體,請使用移液管進(jìn)行操作。
移液器在使用過程中,如果懷疑其精確度,可根據(jù)以下提示自行檢測:
1、自行檢測:目視法檢測:將吸取液體后的移液器垂直靜置15秒,觀察是否有液滴緩慢的流出。若有流出,說明有漏氣現(xiàn)象。壓力泵檢測:使用專用的壓力泵,檢測壓力情況,判斷是否漏氣。
2、 可能的原因: (1)吸頭是否匹配?—— 使用原裝匹配的吸頭 (2)裝配吸頭時有無上緊? (3)移液器內(nèi)部氣密性不好?
移取液體的溫度與吸頭和移液器的溫度不一致的情況下,液體溫度高于吸頭的,移取的液體體積會偏大,液體溫度低于吸頭的,移取的液體體積會偏小。
大部分移液器出廠前的校準(zhǔn)是用水作為標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行測試的,如果所操作的液體與水的比重有很大差異,所給出的不精確度和不準(zhǔn)確度就不能滿足,從而產(chǎn)生誤差。
吸液速度太快會產(chǎn)生反沖和氣泡,導(dǎo)致移液體積不準(zhǔn)確。 ps:移液器長時間不用時建議將刻度調(diào)至最大量程,讓彈簧恢復(fù)原形,延長移液器的使用壽命。
做為液體操作中最常用的手動可調(diào)精密移液器,在使用過程中有些錯誤的操作會給操作本身帶來誤差,有些會造成機(jī)器的損壞等,在這里簡單總結(jié)如下:
錯誤:裝配吸頭時用移液器反復(fù)撞擊吸頭,以上緊; 正確:插入吸頭,左右輕轉(zhuǎn)旋轉(zhuǎn)上緊吸頭;分析:撞擊會造成移液器內(nèi)部齒輪組合的松動,長期操作會對移液器的精確性造成影響;
錯誤:吸頭與移液器不匹配,影響氣密性;正確選用與移液器匹配、有質(zhì)量保證的吸頭; 分析:吸頭的不匹配,主要表現(xiàn)為對氣密性的影響。會直接影響移液器的精確性,通常會移液操作會小于設(shè)定量;
錯誤:吸液時,移液器傾斜吸液;正確:垂直吸液; 分析:傾斜的狀態(tài)會造成氣壓面的改變。會對移液精度造成影響;
錯誤:吸頭內(nèi)含有未打出的液體時,移液器平置于桌面; 正確:將移液器垂直掛在移液器支架上; 分析:吸頭內(nèi)含有未打出液體,移液器平放之后液體有可能會流到移液器體內(nèi)部,這會對移液器內(nèi)部組件造成影響,嚴(yán)重的會造成損壞,較差污染等情況的發(fā)生;
錯誤:用大量程的移液器移取小體積的液體; 正確:移液體積需保證在移液器所提供的量程范圍之內(nèi)才符合不準(zhǔn)確度和不精確度的要求; 分析:因為空氣墊的存在,是造成移液器不準(zhǔn)確度的主要原因。移液器的選擇應(yīng)該是最大量程,最接近目的液體轉(zhuǎn)移量的選型原則;
錯誤:吸取具有強(qiáng)揮發(fā)性的液體;正確:不建議用普通移液器做強(qiáng)揮發(fā)型液體轉(zhuǎn)移; 分析:如果一定要移取強(qiáng)揮發(fā)性的液體,應(yīng)該在移液結(jié)束后立刻拆開移液器,讓蒸汽揮發(fā),同時,建議使用外置活塞式移液器;
錯誤:吸液速度和放液速度過快;正確:慢吸慢放; 分析:快吸對于1mL及以上量程的移液器,很容易造成液體上沖,過快的放液會增加液體的殘留量。
裝吸頭
量程設(shè)定
潤洗
吸頭浸入角度
吸頭浸入深度
吸頭浸入時間
吸液速度
排液及吹液
手溫
移液槍使用訣竅
0
影響移液槍精度因素
02
使用注意事項
移液器的自行檢測
移液器是否有漏氣?
環(huán)境的溫度差異是否會影響準(zhǔn)確度?
樣品的密度和水是否有明顯的區(qū)別?
吸液速度太快是否會導(dǎo)致體積不準(zhǔn)確?
移液器錯誤操作及處理
錯誤:吸取具有強(qiáng)揮發(fā)性的液體;
錯誤:吸液速度和放液速度過快;