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酶標(biāo)儀與分光光度計是一回事嗎?

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2024-03-27
核心提示: ​​酶標(biāo)儀的工作原理及結(jié)構(gòu)01由酶聯(lián)免疫吸附實驗法可知,酶標(biāo)儀應(yīng)該用比色法來分析抗原或抗體的含量,即它應(yīng)依
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酶標(biāo)儀的工作原理及結(jié)構(gòu)


01

由酶聯(lián)免疫吸附實驗法可知,酶標(biāo)儀應(yīng)該用比色法來分析抗原或抗體的含量,即它應(yīng)依照比色原理進行工作。實際上,酶標(biāo)儀就是一臺變相的光電比色計或分光光度計,其基本工作原理與主要結(jié)構(gòu)和光電比色計幾乎相同。圖1是一種單通道、自動進樣的酶標(biāo)儀的工作原理圖。

 

圖1  一種酶標(biāo)儀光路系統(tǒng)

 

光源燈發(fā)出的光線經(jīng)過濾光片或單色器后,成為一束單色光束。該單色光束經(jīng)過塑料微孔板中的待測標(biāo)本,被標(biāo)本吸收掉一部分后,到達光電檢測器。光電檢測器將投射到其上面的光信號的強弱變成電信號的大小。此電信號經(jīng)前置放大、對數(shù)放大、模數(shù)轉(zhuǎn)換等模擬信號處理后,送入微處理器進行數(shù)據(jù)處理和計算。最后由顯示器和打印機將測試結(jié)果顯示、打印出來。

 

微處理機還通過控制電路來控制X、Y方向的機械驅(qū)動機構(gòu)的運動。但對于非自動型的酶標(biāo)儀,它是用手工來移動微孔板的,可以省去X、Y方向的機械驅(qū)動機構(gòu)及其電路,這樣的儀器體積更小,結(jié)構(gòu)也更簡單。

 

微孔板是一種用來盛裝待測樣本的透明塑料板,板上有多排小孔,如有40孔板、55孔板和96孔板等多種規(guī)格。每個小孔可以盛放零點幾毫升的溶液。根據(jù)儀器的不同,既可以一個孔一個孔地檢測,也可以一排孔一排孔地檢測。

 

酶標(biāo)儀既可以使用和分光光度計相同的單色器,也可以使用干涉濾光片來獲得單色光。和光電比色計一樣,使用濾光片作過濾裝置時,將濾光片設(shè)計到微孔板的前面和后面效果是一樣的

 

光源燈發(fā)出的光,經(jīng)過聚光鏡、光闌后,到達反射鏡,經(jīng)反射鏡作90°反射后,垂直通過比色液,然后再經(jīng)濾光片到達光電管。


一般酶標(biāo)儀的光束既可以設(shè)計成從上到下通過比色液,也可以設(shè)計成從下到上通過比色。

 

酶標(biāo)儀有單通道和多通道兩種類型,單通道又分為自動型和手動型兩種。其中,自動型的儀器設(shè)有X和Y兩個方向的驅(qū)動機構(gòu),在機械裝置的驅(qū)動下,微孔板上的小孔一個個依次進入光束下面測試。手動型靠手移動微孔板來進行測量。

 

在單通道酶標(biāo)儀的基礎(chǔ)上,又發(fā)展了多通道、全自動型酶標(biāo)儀。多通道酶標(biāo)儀一般都是自動型的,它設(shè)有多個光束和多個光電檢測器。如8通道的儀器,設(shè)有8條光束(或8個光源)、8個檢測器和8個放大器。在機械驅(qū)動裝置的作用下,樣品被8個一排、8個一排檢測。多通道酶標(biāo)儀的檢測速度快,但其結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜,價格也較貴,多用于大中型醫(yī)院。

 

酶標(biāo)儀的其他部分的結(jié)構(gòu),與光電比色計和小型生化分析儀基本相同。


區(qū)別


02

 

酶標(biāo)儀和普通光電比色計的不同之處在于:


1)盛裝比色液的容器不是使用比色皿,而是使用了塑料微孔板,塑料微孔板常用透明的聚乙烯材料制作,之所以采用塑料微孔板來作固相載體,是利用它對抗原或抗體有較強的吸附這一特點;


2)酶標(biāo)儀的光束是垂直通過待測液的;


3)酶標(biāo)儀通常不使用A而是使用光密度OD來表示吸光度。


酶標(biāo)儀和分光光度計的主要區(qū)別是什么呢?具體差別體現(xiàn)在以下三個方面:

 

1)盛裝待測溶液的容器:分光光度計用的是比色皿,酶標(biāo)儀使用的是塑料微孔板(酶標(biāo)板)。比色皿只能起到盛裝溶液的作用,每個比色皿一次只能盛裝一種溶液。

 

酶標(biāo)板常用透明的聚乙烯材料制成,對抗原抗體有較強的吸附作用,因此用它作為固相載體,酶標(biāo)板通常為48孔或96孔,每個微孔可以盛裝不同的溶液。

 

2)光路的方向:分光光度計是水平光路,而酶標(biāo)儀則是垂直光路。由于酶標(biāo)板盛樣本的塑料微孔板是多排多孔的,光線只能垂直穿過,因此酶標(biāo)儀的光束都是垂直通過待測溶液和微孔板的,光束既可是從上到下,也可以是從下到上穿過比色液。

 

垂直光的特點是標(biāo)本吸光度受液體濃縮或稀釋的影響小,不足之處是受被測樣本液面是否水平、酶標(biāo)板透光性、孔底是否平整等的影響較大。

 

3)光路的長度:由于光密度(OD值)與吸光系數(shù),待測組分的濃度以及光路長度正比關(guān)系。

 

分光光度計采用的比色杯的寬度通常是1cm,所以光路長度固定為1cm。因此不同儀器,不同批次測量的數(shù)據(jù)具有同樣的可比性。

 

酶標(biāo)儀采用的是垂直光路,所以光路的長度應(yīng)該是液體液面的高度,所以測得的值受到樣品的體積的影響。

編輯:songjiajie2010

 
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