在接種過程中,必須進(jìn)行嚴(yán)格的無菌操作無菌操作一般是在無菌室或接種箱內(nèi)進(jìn)行,并靠近煤氣燈(或酒精燈,一般用酒精噴燈)的火焰操作。有條件的也可在超凈工作臺(tái)上操作。
微生物三點(diǎn)接種法:
三點(diǎn)接種是為了獲得單菌落所使用的方法之一,它是在培養(yǎng)皿上接種,即用接種針
蘸取少量霉菌孢子,在澆有瓊脂培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿(俗稱平板)上,以等邊三角形的三點(diǎn)輕輕點(diǎn)一點(diǎn),培養(yǎng)后即在此三點(diǎn)上長(zhǎng)出菌落。其優(yōu)點(diǎn)是:同種菌落有三個(gè)重復(fù),同時(shí)在菌落彼此相接近的邊緣常留有一條狹窄的空白地帶此處菌絲生長(zhǎng)稀疏,較透明,還分化出典型子實(shí)體,因此可以直接把培養(yǎng)皿放在低倍鏡下觀察,便于根據(jù)形態(tài)特點(diǎn)進(jìn)行菌種的鑒定。具體操作如下
步驟一,倒平板,將已滅菌的瓊脂培養(yǎng)基放在水浴鍋上加熱熔化,待冷卻至45℃(手握不覺太燙為宜)后,用無菌操作法倒平板。
步驟二,標(biāo)明三點(diǎn)位置,待平板凝固后,在培養(yǎng)皿底部注明菌種、日期等,并以等邊三角形的三個(gè)頂點(diǎn)標(biāo)上記號(hào)。
步驟三,右手拿接種針,先在火焰上燒紅滅菌并在平板培養(yǎng)基的邊緣冷卻且蘸濕。
步驟四,蘸取孢子,將滅過菌而且蘸濕的接種針伸入菌種管,用針尖蘸取少量霉菌孢子。
步驟五,點(diǎn)接,以垂直法或水平法把接種針上的孢子點(diǎn)到預(yù)先標(biāo)記好的部位,注意切勿刺破培養(yǎng)基。
將培養(yǎng)皿倒置,于28℃恒溫條件下培養(yǎng),48h后觀察生長(zhǎng)情況。