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大腸菌群檢測(cè)MPN法與平板計(jì)數(shù)法比較!

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2021-01-11
核心提示:GB4789.3-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 大腸菌群計(jì)數(shù)》中規(guī)定了大腸菌群計(jì)數(shù)的MPN法與平板計(jì)數(shù)法,那這兩種方法怎么
 GB4789.3-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 大腸菌群計(jì)數(shù)》中規(guī)定了大腸菌群計(jì)數(shù)的MPN法與平板計(jì)數(shù)法,那這兩種方法怎么選擇以及有什么區(qū)別呢?今天小編就跟大家普及一下~
圖片

二者范圍不同:

GB4789.3-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 大腸菌群計(jì)數(shù)》范圍中規(guī)定:“本標(biāo)準(zhǔn)第一法適用于大腸菌群含量較低的食品中大腸菌群的計(jì)數(shù);第二法適用于大腸菌群含量較高的食品中大腸菌群的計(jì)數(shù)。”這里所說的含量高低通常以100CFU為準(zhǔn),即含量低于100CFU采用MPN法,含量高于100CFU采用CFU法。


概念不同:

•MPN(most probable number)法:即最近似數(shù)法,也稱為最可能數(shù)法,是食品檢驗(yàn)中常用的方法。1915年,McCrady首次發(fā)表了用MPN法(最大可能數(shù)法) 來估算細(xì)菌濃度的方法, 這是一種應(yīng)用概率理論來估算細(xì)菌濃度的方法。


•平板計(jì)數(shù)法 (colony forming units):CFU即菌落形成單位,樣品經(jīng)過處理培養(yǎng)后我們數(shù)出平板上所生長(zhǎng)出的菌落個(gè)數(shù),從而計(jì)算出每毫升或每克待檢樣品中可以培養(yǎng)出多少個(gè)菌落,以CFU/mL或CFU/g報(bào)告之。


•濾膜法(membrane filter method):將一定量水樣注入已滅菌的微孔薄膜的濾器中,經(jīng)過抽濾,細(xì)菌被截留在濾膜上,將濾膜貼于培養(yǎng)基上,經(jīng)培養(yǎng)后計(jì)數(shù)和鑒定濾膜上生長(zhǎng)的菌落,依據(jù)過濾水樣計(jì)算每升或每100毫升水樣中的菌落總數(shù)。

•菌落:是指細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)繁殖而形成的能被肉眼識(shí)別的生長(zhǎng)物,它是由數(shù)以萬計(jì)相同的細(xì)菌集合而成。

原理不同:
•MPN法:利用待測(cè)微生物的特殊生理功能的選擇性來擺脫其他微生物類群的干擾,并通過該生理功能的表現(xiàn)來判斷該類群微生物的存在和豐度。因?yàn)榧?xì)菌在樣本內(nèi)的分布是隨機(jī)的,所以檢測(cè)細(xì)菌時(shí),可應(yīng)用概率理論計(jì)算菌數(shù),實(shí)驗(yàn)結(jié)果以MPN值表示,但MPN值并不能表示實(shí)際菌落數(shù), 實(shí)際菌落數(shù)有可能落在置信區(qū)間內(nèi)的任何一點(diǎn),MPN值是落在這個(gè)置信區(qū)間內(nèi)概率最大的一點(diǎn)。
舉例說:稀釋度為 0.01,0.001,0.0001所對(duì)應(yīng)的陽性管數(shù)分別為 2-0-0 ;
查MPN檢索表可知:
MPN值為92 CFU/mL(g), 當(dāng)置信度為95%,則其下限和上限分別為14,380,即對(duì)應(yīng)的菌落濃度區(qū)間為14~380 CFU/mL(g),意思是:這個(gè)檢驗(yàn)結(jié)果顯示細(xì)菌濃度落在14-380 CFU/mL(g)區(qū)間均有可能,只不過92 CFU/mL(g)出現(xiàn)的概率最大,概率為31.9%. 

平板計(jì)數(shù)法:平板菌落計(jì)數(shù)法是根據(jù)微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的一個(gè)菌落是由一個(gè)單細(xì)胞繁殖而成的現(xiàn)象進(jìn)行的,也就是說一個(gè)菌落即代表一個(gè)單細(xì)胞。計(jì)數(shù)時(shí),先將待測(cè)樣品作一系列稀釋,樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋后,其中的微生物充分分散為單個(gè)細(xì)胞,取一定量的稀釋液接種到平板上,經(jīng)過培養(yǎng),由每個(gè)單細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖而形成的肉眼可見的菌落,即一個(gè)單菌落應(yīng)代表原樣品中的一個(gè)單細(xì)胞。統(tǒng)計(jì)菌落數(shù),根據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣接種量即可換算出樣品中的含菌數(shù)。


濾膜法:在壓力差的作用下,懸浮液中的液體(或氣體)透過可滲性介質(zhì)(過濾介質(zhì)),直徑大于網(wǎng)孔直徑的菌體為介質(zhì)所截留,從而實(shí)現(xiàn)樣品和菌體的分離。然后將濾膜放在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng),菌體可直接在膜上生長(zhǎng),從而可直接計(jì)數(shù)。

 

MPN優(yōu)缺點(diǎn)

優(yōu)點(diǎn):操作簡(jiǎn)便、靈敏度較高,時(shí)間短,可直接觀察試管得出結(jié)論,每個(gè)接種稀釋度均有重復(fù),重復(fù)次數(shù)越多,誤差就會(huì)越小。

 

缺點(diǎn):要求樣品具有均一性,適合檢驗(yàn)液體樣品,且只能用于檢驗(yàn)在發(fā)酵培養(yǎng)基中產(chǎn)氣的菌種。

 

注意事項(xiàng):需選擇合適的稀釋度和接種量。

 

平板計(jì)數(shù)法優(yōu)缺點(diǎn)

優(yōu)點(diǎn):

1、能測(cè)出樣品中的活菌數(shù),直觀,能夠直接讀數(shù)

2、平板菌落計(jì)數(shù)法通常做梯度稀釋,所以計(jì)數(shù)的線性范圍大。

3、由于是菌懸液傾注或涂布,所以比較均勻,能較好的反應(yīng)菌落的疏密程度。

4、靈敏,平行性較好。

 

缺點(diǎn):

1、手續(xù)較繁,而且測(cè)定值常受各種因素的影響。

2、厭氧或微需氧菌、有特殊營(yíng)養(yǎng)要求的以及非嗜中溫的細(xì)菌,比較難檢測(cè)出。

3、菌落總數(shù)并不能區(qū)分其中細(xì)菌的種類,所以有時(shí)被稱為雜菌數(shù),需氧菌數(shù)等。

4、長(zhǎng)成的一個(gè)單菌落也可能來自樣品中的2~3或更多個(gè)細(xì)胞。因此平板菌落計(jì)數(shù)的結(jié)果往往偏低。

5、檢驗(yàn)時(shí)間長(zhǎng)。


注意事項(xiàng):

樣品需要充分均勻以及選擇合適稀釋度和接種量,檢驗(yàn)過程必須嚴(yán)格無菌,以防污染雜菌。

濾膜法優(yōu)缺點(diǎn)  

優(yōu)點(diǎn):
1、可以檢測(cè)大量的樣品。
2、濃縮效應(yīng)使微生物檢測(cè)的準(zhǔn)確度提高。
3、帶有菌落的濾膜,可作為檢測(cè)的永久記錄存檔。
4、可見的菌落和樣品量直接對(duì)應(yīng),得出定量結(jié)果。

缺點(diǎn):
1、成本高。
2、操作要求高。

注意事項(xiàng):

對(duì)樣品的流動(dòng)性要求比較高,并且含菌量不能太高。

分類以及操作方法

MPN法:根據(jù)需要以及檢驗(yàn)的精度不一樣可使用9管法以及15管法;其中9管法通常用作食品檢驗(yàn),而15管法用在飲用水的檢驗(yàn)(15管法的精度要高些);基本操作:樣品梯度稀釋——接種——培養(yǎng)——觀察結(jié)果——查表報(bào)告。

 

平板計(jì)數(shù)法:有平板傾注法,一般檢驗(yàn)使用的方法;平板涂布法,用于細(xì)菌含量比較高,并且要求知道細(xì)菌菌落形態(tài)(只計(jì)數(shù)特定細(xì)菌);以及濾膜法,檢測(cè)特定種類菌常用方法,應(yīng)用越來越廣泛;基本操作一般包括:樣品的稀釋--傾注平皿--培養(yǎng)48小時(shí)--計(jì)數(shù)報(bào)告。(濾膜法是:樣品——過濾——貼濾膜——培養(yǎng)——計(jì)數(shù)報(bào)告。)

 

適用性

MPN法:適用于具有特殊生理功能的微生物類群或者檢測(cè)帶有大量競(jìng)爭(zhēng)菌的食品及其原料和未經(jīng)處理的含少量金黃色葡萄球菌的食品(土壤、污水、牛奶等)。

 

平板計(jì)數(shù)法:應(yīng)用廣泛,是檢驗(yàn)、菌種分離、純化等用得最多的方法(固體、液體樣品均可)。

 

濾膜法:主要應(yīng)用于潔凈度較高的樣品,并且樣品的流動(dòng)性決定了可操作性。

 

衛(wèi)生學(xué)意義

兩者都是檢測(cè)的活菌數(shù),MPN是通過極大近似值然后估計(jì),求出分布函數(shù)中的參數(shù)、置信區(qū)間,再估計(jì);但是CFU通過數(shù)據(jù)直接求數(shù)學(xué)期望,平均值和方差。

 

測(cè)定結(jié)果判定食品被細(xì)菌污染的程度及衛(wèi)生質(zhì)量,一定程度反映食品在生產(chǎn)過程中是否符合衛(wèi)生要求,以便對(duì)被檢樣品做出適當(dāng)?shù)男l(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)。多少在一定程度上標(biāo)志著食品衛(wèi)生質(zhì)量的優(yōu)劣。

編輯:songjiajie2010

 
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