1 方法概述：

本測試方法采用沉降法，即通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿，經(jīng)若干時間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，以平板培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)來判定潔凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù)，并以此來評定潔凈室（區(qū)）的潔凈度。

2 所用的儀器和設(shè)備

2.1 高壓消毒鍋使用時應(yīng)嚴(yán)格按照儀器說明書操作。

2.2 恒溫培養(yǎng)箱必須定期對培養(yǎng)箱的溫度進(jìn)行校驗(yàn)。

2.3 培養(yǎng)皿一般采用Ф90mm×15mm 的硼硅酸玻璃培養(yǎng)皿。

2.4 普通肉湯瓊脂培養(yǎng)基的準(zhǔn)備及滅菌見附件A

3 測試步驟

3.1 采樣方法

將已制備好的培養(yǎng)皿，按潔凈室沉降菌采樣點(diǎn)布置圖的要求放置，打開培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基面暴露30分鐘（靜態(tài)），再將培養(yǎng)皿蓋蓋上后倒置。

3.2 培養(yǎng)

3.2.1 全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

3.2.2 在30℃-35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于48h。

3.2.3 每批培養(yǎng)基應(yīng)有對照試驗(yàn)，檢驗(yàn)培養(yǎng)基本身是否污染。可每批選定3只培養(yǎng)皿作對照培養(yǎng)。

3.3 菌落計(jì)數(shù)

3.3.1 用肉眼直接計(jì)數(shù)，標(biāo)記或在菌落計(jì)數(shù)器上點(diǎn)計(jì)，然后用5-10倍放大鏡檢查，看是否有遺漏。

3.3.2 若培養(yǎng)皿上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上菌落計(jì)數(shù)。

4 注意事項(xiàng)

4.1 測試用具要作滅菌處理，以確保測試的可靠性，準(zhǔn)確性。

4.2 采取一切措施防止人為對樣本的污染。

4.3 對培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)做詳細(xì)的記錄。

4.4 由于細(xì)菌種類繁多，差別甚大，計(jì)數(shù)時一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細(xì)觀察，不要漏計(jì)培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落，并須注意細(xì)菌菌落與培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別，必要時用顯微鏡鑒別。

4.5 采樣前仔細(xì)檢查每個培養(yǎng)皿的質(zhì)量，如發(fā)現(xiàn)變質(zhì)，破損或污染的應(yīng)剔除。

5 測試規(guī)則

5.1 沉降菌檢測前，被檢測潔凈室（區(qū)）的溫濕度須達(dá)到規(guī)定的要求，靜壓差、換氣次數(shù)、空氣流速控制在規(guī)定值內(nèi)。

5.1.2 沉降菌檢測前，被檢測潔凈室（區(qū)）已經(jīng)過消毒。

5.1.3 測試狀態(tài)有靜態(tài)和動態(tài)兩種，測試狀態(tài)的選擇必須符合生產(chǎn)的要求，并在報(bào)告中注明測試狀態(tài)。

5.2 測試人員

5.2.1  測試人員必須穿戴符合環(huán)境潔凈度級別的工作服。

5.2.2  靜態(tài)測試時，室內(nèi)測試人員不得多于二人。

5.3  測試時間

5.3.1 對單向流，測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)運(yùn)行不少于15min 后開始。

5.3.2 對非單向流，測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于30min后開始。

5.4 沉降菌計(jì)數(shù)

5.4.1  采樣點(diǎn)數(shù)目及其布置

最少采樣點(diǎn)數(shù)目如下表

在滿足最少測點(diǎn)數(shù)的同時，還宜滿足最少培養(yǎng)皿數(shù)見下表

采樣點(diǎn)的布置

工作區(qū)采樣點(diǎn)的位置離地0.8m-1.5m左右（略高于工作面）。     

可在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動范圍處增加采樣點(diǎn)。采樣點(diǎn)位置的詳細(xì)規(guī)則見附件B。

房間采樣點(diǎn)超過10個點(diǎn)，每7天對所有采樣點(diǎn)輪流監(jiān)測一次。

5.5 記錄

監(jiān)測記錄中應(yīng)記錄房間溫度、相對濕度、測試狀態(tài)。

5.6 結(jié)果計(jì)算

5.6.1  用計(jì)數(shù)方法得出各個培養(yǎng)皿的菌落數(shù)。

5.6.2  平均菌落數(shù)的計(jì)算，見式（1）。

式(1)

式中：

m-平均菌落數(shù)；

m1-1號培養(yǎng)皿菌落數(shù)；

m2-2號培養(yǎng)皿菌落數(shù)；

mn-n號培養(yǎng)皿菌落數(shù)；

N-培養(yǎng)皿總數(shù)。

5.7 結(jié)果評定標(biāo)準(zhǔn)：

靜態(tài)：

注：表中各數(shù)值均為平均值。

5.7.1 潔凈室（區(qū)）內(nèi)的平均菌落數(shù)必須低于所選定的評定標(biāo)準(zhǔn)。

5.7.2 若某潔凈室（區(qū)）內(nèi)的平均菌落數(shù)超過評定標(biāo)準(zhǔn)，則必須對此區(qū)域先進(jìn)行消毒，然后重新采樣兩次，測試結(jié)果均須合格。

6 附件

6.1 附件A：培養(yǎng)基的準(zhǔn)備及滅菌

6.1.1 培養(yǎng)基的準(zhǔn)備

培養(yǎng)基應(yīng)購買國家認(rèn)可的培養(yǎng)基。

6.1.2 培養(yǎng)基平皿的制備

6.1.2.1 將Ф90mm 的培養(yǎng)皿置于121℃濕熱滅菌20min或160℃干熱滅菌2h。

6.1.2.2 將培養(yǎng)基加熱熔化，冷至55℃時，在無菌操作要求下將培養(yǎng)基注入培養(yǎng)皿，每皿約15mL。

6.1.2.3 待瓊脂凝固后，將培養(yǎng)基平皿倒置于30℃-35℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h，若培養(yǎng)基平皿上確無菌落生長，即可供采樣用。

6.1.2.4 注：制備好的培養(yǎng)基平皿宜在2℃-8℃的環(huán)境中存放。

6.2  附件B：采樣點(diǎn)布置

潔凈區(qū)采樣點(diǎn)的布置力求均勻，避免采樣點(diǎn)在某局部區(qū)域過于集中，某局部區(qū)域過于稀疏。