培養(yǎng)基是是發(fā)酵過(guò)程或動(dòng)植物細(xì)胞大量培養(yǎng)中供微生物或動(dòng)、植物細(xì)胞的生長(zhǎng)、繁殖或積累代謝產(chǎn)物,以合成生物化工產(chǎn)品所必需的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。培養(yǎng)基的制備和使用是微生物實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作的重要環(huán)節(jié)。近些年來(lái)商品化的干燥培養(yǎng)基成品培養(yǎng)基發(fā)展迅速，但由于該行業(yè)的生產(chǎn)工藝設(shè)備還相對(duì)比較落后,質(zhì)控手段也不夠健全,市場(chǎng)監(jiān)管又比較薄弱,這些都影響培養(yǎng)基的質(zhì)量本文對(duì)微生物實(shí)驗(yàn)室在培養(yǎng)基購(gòu)置貯存、制備、使用等方面應(yīng)采取的質(zhì)量控制措施進(jìn)行討論,以便微生物實(shí)驗(yàn)室不斷完善和提高培養(yǎng)基的質(zhì)控水平。

1 培養(yǎng)基的購(gòu)置與驗(yàn)收

1.1 購(gòu)置

微生物檢驗(yàn)用的各種藥品、試劑和干粉培養(yǎng)基必須是專(zhuān)業(yè)廠家生產(chǎn)的產(chǎn)品,質(zhì)量必須符合有關(guān)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),并且生產(chǎn)商應(yīng)提供培養(yǎng)基的名稱(chēng)、產(chǎn)品編號(hào)、批號(hào)、各種成分和任何補(bǔ)充成分、培養(yǎng)基使用前的pH值貯存資料及有效期等信息,以利于使用者對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行記錄和比較。應(yīng)選擇產(chǎn)品市場(chǎng)信譽(yù)度高、有質(zhì)量保證能力和服務(wù)保證能力的企業(yè)；企業(yè)是否通過(guò)了質(zhì)量管理體系的認(rèn)證是較為客觀的評(píng)價(jià)指標(biāo)。

1.2 驗(yàn)收

購(gòu)買(mǎi)的培養(yǎng)基到貨后，應(yīng)有專(zhuān)人做好接受和驗(yàn)收工作，應(yīng)仔細(xì)核對(duì)生產(chǎn)企業(yè)提供的資料、培養(yǎng)基名稱(chēng)、規(guī)格數(shù)量、外觀特征、批號(hào)、保質(zhì)期是否符合要求。每批培養(yǎng)基到貨物后都應(yīng)對(duì)培養(yǎng)基的質(zhì)量進(jìn)行檢測(cè)，滿(mǎn)足檢測(cè)方法規(guī)定的要求后方可投入使用。

2 培養(yǎng)基的儲(chǔ)存

干粉培養(yǎng)基應(yīng)保存在陰涼干燥處，要避免陽(yáng)光直射；未開(kāi)瓶的培養(yǎng)基保存期限應(yīng)按照生產(chǎn)廠家提供的信息執(zhí)行，開(kāi)瓶后的干粉培養(yǎng)基易吸濕，應(yīng)注意防潮并盡快用完。應(yīng)定期對(duì)儲(chǔ)存中的培養(yǎng)基進(jìn)行常規(guī)檢查，如容器密閉性復(fù)查、首次開(kāi)封日期、內(nèi)容物的感官檢查，如果培養(yǎng)基發(fā)生結(jié)塊、顏色異常和其他變質(zhì)跡象就不能再使用。

3 培養(yǎng)基的制備

3.1 培養(yǎng)基用水

培養(yǎng)基制備用水應(yīng)使用電阻率不小于30萬(wàn)Ωcm的蒸餾水或與其同質(zhì)的水，最好不使用離子交換器生產(chǎn)的去離子水。

3.2 稱(chēng)量

稱(chēng)量時(shí)要用專(zhuān)用的角匙，避免交叉污染而影響檢驗(yàn)結(jié)果；干粉培養(yǎng)基易吸潮，如有條件，盡量在濕度較低的房間稱(chēng)取培養(yǎng)基。干粉培養(yǎng)基應(yīng)嚴(yán)格按照生產(chǎn)商提供的有關(guān)說(shuō)明準(zhǔn)確配制。

3.3 復(fù)水

復(fù)水時(shí)不得用銅鍋或鐵鍋，以防有離子混入培養(yǎng)基中，影響微生物的生長(zhǎng)；容器的大小需大于復(fù)水后培養(yǎng)基總體積的2倍以上，避免在加熱溶解過(guò)程中，培養(yǎng)基溢出；含有瓊脂粉的培養(yǎng)基，在加熱溶解之前可以浸泡數(shù)分鐘；加熱培養(yǎng)基時(shí)一定要進(jìn)行攪拌，特別是瓊脂類(lèi)培養(yǎng)基。為避免燒焦和沸騰溢出，對(duì)于少量的培養(yǎng)基最好使用沸水浴進(jìn)行加熱。燒糊的培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)被破壞，并可產(chǎn)生有毒物質(zhì)，如發(fā)現(xiàn)焦化，或未溶解均勻前培養(yǎng)基有溢出，該培養(yǎng)基即不能使用，應(yīng)重新制備。對(duì)于瓊脂類(lèi)培養(yǎng)基進(jìn)行再融化時(shí)應(yīng)使用沸水浴或流動(dòng)蒸汽進(jìn)行加熱,最多只能加熱兩次,第二次再融化后仍未用完的培養(yǎng)基應(yīng)棄去。

3.4 滅菌

培養(yǎng)基應(yīng)按培養(yǎng)基配方中 規(guī)定的條件及時(shí)進(jìn)行滅菌，通常是121℃ 15 min，以保證滅菌效果和不損傷培養(yǎng)基的有效成份，含糖或特殊培養(yǎng)基，按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)或生產(chǎn)商提供的說(shuō)明滅菌。已配制好的培養(yǎng)基必須立即滅菌，避免微生物生長(zhǎng)繁殖而消耗養(yǎng)分，改變培養(yǎng)基的酸堿度。高溫可破壞培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分，還會(huì)使瓊脂的凝膠強(qiáng)度下降，因此必須嚴(yán)格控制滅菌溫度和時(shí)間，并且不可重復(fù)滅菌。高壓蒸汽滅菌鍋的壓力表等要定期進(jìn)行檢定，并定期采用生物指示菌法或化學(xué)變色紙片對(duì)滅菌效果進(jìn)行驗(yàn)證。

3.5 pH測(cè)定

微生物必須在適宜的pH范圍內(nèi)才能正常生長(zhǎng)繁殖或體現(xiàn)其生物特性。滅菌前后PH會(huì)有所變化，所以滅菌前就要準(zhǔn)備好，可以用1mol/L Na0H或 lmol/L HCL調(diào)整，注意不可反復(fù)調(diào)pH，否則會(huì)影響培養(yǎng)基的滲透壓。

3.6 配制好的培養(yǎng)基保存

滅菌以后培養(yǎng)基應(yīng)該迅速冷卻至所需溫度，避免長(zhǎng)時(shí)間保存在滅菌鍋內(nèi)，造成過(guò)度滅菌，影響培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分或選擇性效果。所以建議平板傾注后立即使用。保存時(shí),盡可能貯存在不會(huì)改變其成分的條件下，即避光或在4 ℃ ~ 12℃冰箱密閉保存。如果保存時(shí)間超過(guò)2d,應(yīng)將其放人密封的塑料袋中保存;配好的肉湯類(lèi)培養(yǎng)基如果保存時(shí)間超過(guò)2個(gè)星期,應(yīng)將其放在帶有螺旋蓋的試管或其他密閉的試管或容器中防止蒸發(fā)。

4 培養(yǎng)基的性能測(cè)試

4.1 外觀控制

制備好的培養(yǎng)基應(yīng)有相應(yīng)的顏色，一般的培養(yǎng)基應(yīng)澄清、無(wú)渾濁、無(wú)沉淀。使用前應(yīng)檢查培養(yǎng)基的顏色是否發(fā)生變化，是否蒸發(fā)/脫水。

4.2 污染控制

從每批制備好的培養(yǎng)基中選取部分進(jìn)行污染測(cè)試（無(wú)菌試驗(yàn)），確定無(wú)微生物生長(zhǎng)方可使用。

4.3 性能測(cè)試

4.3.1 測(cè)試菌株選擇 

測(cè)試菌株是具有其代表種的穩(wěn)定特性并能有效證明實(shí)驗(yàn)室特定培養(yǎng)基最佳性能的一套菌株，應(yīng)來(lái)自國(guó)際/國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)菌種保藏中心ATCC標(biāo)準(zhǔn)菌株，菌株的選擇參考衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T232-2002《商業(yè)性微生物培養(yǎng)基質(zhì)量檢驗(yàn)規(guī)程》。

4.3.2 定量測(cè)試方法 

改良Miles-Misra法：測(cè)試菌株過(guò)夜培養(yǎng)物10倍遞增稀釋?zhuān)粶y(cè)試平板和參照平板劃分為4個(gè)區(qū)域并標(biāo)記；從最高稀釋度開(kāi)始，分別滴一滴稀釋液于試驗(yàn)平板和對(duì)照平板標(biāo)記好的區(qū)域；將稀釋液涂滿(mǎn)整個(gè)1/4區(qū)域，37°C培養(yǎng)18小時(shí)；對(duì)易計(jì)數(shù)的區(qū)域計(jì)數(shù)，按公式計(jì)算生長(zhǎng)率（生長(zhǎng)率=待測(cè)培養(yǎng)基平板上得到的菌落總數(shù)/參考培養(yǎng)基平板上獲得的菌落總數(shù)）。非選擇性培養(yǎng)基上目標(biāo)菌的生長(zhǎng)率應(yīng)不低于0.7，該類(lèi)培養(yǎng)基應(yīng)易于目標(biāo)菌生長(zhǎng)；選擇性培養(yǎng)基上目標(biāo)菌的生長(zhǎng)率應(yīng)不低于0.1 。

4.3.3 半定量測(cè)試方法 

改進(jìn)的劃線法接種法：平板分ABCD四區(qū)，共劃16條線，平行線大概相隔0.5cm，每條有菌落生長(zhǎng)的劃線記作1分，每個(gè)僅一半的線有菌落生長(zhǎng)記作0.5分，沒(méi)有菌落生長(zhǎng)或生長(zhǎng)量少于劃線的一半記作0分，分?jǐn)?shù)加起來(lái)得到生長(zhǎng)指數(shù)G。目標(biāo)菌在培養(yǎng)基上應(yīng)呈現(xiàn)典型的生長(zhǎng)，而非目標(biāo)菌的生長(zhǎng)應(yīng)部分或完全被抑制，目標(biāo)菌的生長(zhǎng)指數(shù)G大于6時(shí)，培養(yǎng)基可接受 。

4.3.4 定性測(cè)試方法 

平板接種觀察法：用接種環(huán)取測(cè)試菌培養(yǎng)物，在測(cè)試培養(yǎng)基表面劃平行直線。按標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的培養(yǎng)時(shí)間和溫度對(duì)接種后的平板進(jìn)行培養(yǎng)，目標(biāo)菌應(yīng)呈現(xiàn)良好生長(zhǎng)，并有典型的菌落外觀、大小和形態(tài)，非目標(biāo)菌應(yīng)是微弱生長(zhǎng)或無(wú)生長(zhǎng) 。

5 討論

培養(yǎng)基的質(zhì)量是微生物實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作的基礎(chǔ)，事關(guān)檢測(cè)工作的準(zhǔn)確性、可靠性，在微生物實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作中舉足輕重。如果在工作中忽視任何一個(gè)環(huán)節(jié)的質(zhì)量問(wèn)題，都將導(dǎo)致檢驗(yàn)結(jié)果科學(xué)性、客觀性的偏離。因此，加強(qiáng)培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制，認(rèn)真地做好培養(yǎng)基的質(zhì)控工作，不斷完善和提高培養(yǎng)基的質(zhì)控水平，才能為微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室提供高質(zhì)量的培養(yǎng)基。