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病原生物學(xué)與免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)基本操作方法及注意事項(xiàng)

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2013-11-25  來(lái)源:實(shí)驗(yàn)室資訊網(wǎng)
核心提示:病原生物學(xué)是研究病原生物的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)規(guī)律以及與機(jī)體相互作用關(guān)系的一門學(xué)科,主要包括醫(yī)學(xué)微生物學(xué)和人體寄生蟲(chóng)學(xué)。
 病原生物學(xué)是研究病原生物的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)規(guī)律以及與機(jī)體相互作用關(guān)系的一門學(xué)科,主要包括醫(yī)學(xué)微生物學(xué)和人體寄生蟲(chóng)學(xué)。醫(yī)學(xué)微生物學(xué)主要研究病原微生物與人類疾病的關(guān)系問(wèn)題,包括研究病原微生物的生命特征或生物學(xué)特性,致病性與致病機(jī)理、感染與免疫、特異性診斷和防治等問(wèn)題; 人體寄生蟲(chóng)學(xué)是研究人體寄生蟲(chóng)的形態(tài)結(jié)構(gòu)、生活史、致病機(jī)制、實(shí)驗(yàn)診斷、流行規(guī)律與防治措施的一門科學(xué);免疫學(xué)是研究機(jī)體免疫系統(tǒng)的組成、結(jié)構(gòu)與功能、免疫應(yīng)答的發(fā)生機(jī)制以及免疫學(xué)在疾病診斷與防治中應(yīng)用的一門科學(xué)。
 
一. 實(shí)驗(yàn)要求
1. 實(shí)驗(yàn)前必須掌握與實(shí)驗(yàn)相關(guān)的醫(yī)學(xué)微生物學(xué)、醫(yī)學(xué)寄生蟲(chóng)學(xué)及醫(yī)學(xué)免疫學(xué)基礎(chǔ)理論。做好預(yù)習(xí),明確實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c實(shí)驗(yàn)內(nèi)容。
2. 對(duì)于設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn),在老師的指導(dǎo)下,注意發(fā)揮自身潛能,勤于思考,靈活掌握所學(xué)知識(shí)。
3. 在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中做到三嚴(yán):嚴(yán)肅、嚴(yán)格、嚴(yán)謹(jǐn)。如實(shí)記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果,按規(guī)定完成實(shí)驗(yàn)報(bào)告。對(duì)于失敗實(shí)驗(yàn)結(jié)果要分析原因,必要時(shí)重復(fù)實(shí)驗(yàn)。
4. 嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室規(guī)則。
 
二. 實(shí)驗(yàn)室規(guī)則
1.進(jìn)實(shí)驗(yàn)室穿工作服,離開(kāi)時(shí)脫下,反折。
2.除必需教材、文具外,其他物品禁止帶入實(shí)驗(yàn)室。
3.按規(guī)定位置就坐。保持實(shí)驗(yàn)室安靜,不得隨意走動(dòng)、進(jìn)出。
4.實(shí)驗(yàn)室內(nèi)禁止飲食、吸煙。謹(jǐn)防經(jīng)口感染病原。
5.實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)嚴(yán)格按實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)和教師的要求進(jìn)行。
6.實(shí)驗(yàn)過(guò)程中若不慎將傳染性標(biāo)本污染桌面、手及其他物品時(shí),應(yīng)立即報(bào)告老師緊急處理,不得擅自處理。常見(jiàn)處理如下:
(1)皮膚破傷:先除盡異物,用無(wú)菌生理鹽水洗凈后,涂以2%紅汞或2%碘酒,必要時(shí)進(jìn)行包扎。
(2)灼傷:涂以凡士林油,5%鞣酸或2%苦味酸。
(3)化學(xué)藥品腐蝕傷:若為強(qiáng)酸,先用大量清水沖洗,再以5%碳酸氫鈉或氫氧化銨溶液洗滌中和之;強(qiáng)堿腐蝕傷,則先以大量清水沖洗后,再用5%醋酸或5%硼酸溶液洗滌中和之。若受傷部位是眼部,經(jīng)過(guò)上述步驟處理后,最后滴入橄欖油或液體石
臘1、2 滴,滋潤(rùn)之。
(4)吸入病菌菌液:應(yīng)立即吐入盛有消毒液的容器內(nèi)消毒,并用1:1000高錳酸鉀漱口;根據(jù)菌類不同,必要時(shí)需服藥預(yù)防。
(5)細(xì)菌污染衣物:應(yīng)立即脫下,放入3%來(lái)蘇爾或3%氯胺液內(nèi)浸泡半小時(shí),或仔細(xì)包好經(jīng)高壓蒸汽消毒后清洗。
(6)菌液污染桌面:傾倒適量2-3%來(lái)蘇爾或0.5% 84 消毒液于污染處,浸泡半小時(shí)后抹去。若手上沾有活菌,應(yīng)浸泡于上述消毒液10-20 分鐘后,再以肥皂水沖刷之。
7.看示教時(shí),未經(jīng)允許,不得移動(dòng)顯微鏡推進(jìn)尺。
8.愛(ài)護(hù)實(shí)驗(yàn)室器材及設(shè)備,認(rèn)真填寫實(shí)驗(yàn)設(shè)備使用紀(jì)錄。不慎發(fā)生損壞時(shí),應(yīng)立即報(bào)告老師,照章賠償。
9.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,凡使用過(guò)的實(shí)驗(yàn)器材必須放在指定地點(diǎn),如吸過(guò)菌液的吸管,毛細(xì)吸管要投入含有2-3%來(lái)蘇爾或0.1%新潔爾滅的玻璃筒中,或置“待消毒”處,不得放在桌上,亦不可沖洗于水槽內(nèi)。用過(guò)的波片也應(yīng)放于含有消毒液的容器內(nèi)。需要培養(yǎng)的實(shí)
驗(yàn)材料集中后放入溫箱中培養(yǎng)。
10.實(shí)驗(yàn)完畢,應(yīng)及時(shí)清理實(shí)驗(yàn)室(包括桌面,地面,試驗(yàn)用具等),值日生打掃室內(nèi)衛(wèi)生,管好門窗、水電。離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室前,將雙手在消毒液內(nèi)浸泡3-5分鐘,再用清水洗凈,方可離室。
 
三. 顯微鏡的使用
(一)普通光學(xué)顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)
光學(xué)顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)包括光學(xué)和機(jī)械兩個(gè)部分。光學(xué)部分主要有目鏡、物鏡、鏡筒、內(nèi)置光源(或反光鏡)、光闌等;機(jī)械部分包括鏡座、鏡臂、調(diào)節(jié)螺栓、載物臺(tái)、夾持器、
轉(zhuǎn)換器、粗調(diào)焦手輪及細(xì)調(diào)焦手輪等。(見(jiàn)圖1-1)
 
圖1 光學(xué)顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)示意圖

(二)顯微鏡(油鏡的使用)
 
顯微鏡的物鏡一般有低倍鏡、高倍鏡及油鏡。病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中最常用者為油鏡。
1.油鏡的原理 使用油鏡時(shí)需在玻片上滴加香柏油。由于從標(biāo)本玻片上透過(guò)的光線,因介質(zhì)密度不同,部分光線發(fā)生折射散失,使射入物鏡光線減少(高倍鏡孔徑較大,影響不顯著),因油鏡的孔徑較小,進(jìn)入的光線則不夠,致使物象顯現(xiàn)不清。當(dāng)在油鏡與標(biāo)本片之間加香柏油后,香柏油折射率(n=1.515)和玻璃的折射率(n=1.52),因此可增加進(jìn)入透鏡的光線,使視野亮度加強(qiáng)。

2. 在油鏡頭上常有下列幾種標(biāo)記:①放大倍數(shù)是90×或100/;若鏡筒的長(zhǎng)度不變,顯微鏡的放大倍數(shù)=目鏡倍數(shù)乘以物鏡的倍數(shù)。②鏡頭下緣有一白色線圈或黑色線圈;③刻有
“油”或外文“HI”、“Oel”、“Oil”等字樣。④油鏡頭的長(zhǎng)度大于低倍鏡和高倍鏡。

3. 使用方法
① 對(duì)光 轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器,將低倍鏡鏡頭(4 倍、10 倍)轉(zhuǎn)至載物臺(tái)中央透光孔位置,打開(kāi)透光光闌,對(duì)光,直至目鏡中出現(xiàn)光線最明亮、最均勻的視場(chǎng)為止。顯微鏡的光源可分為內(nèi)置光源和外置照明。內(nèi)置光源:接通電源,按下底座的開(kāi)關(guān),電源打開(kāi)即可。外置光源:將光圈放到最大位置,在用眼睛觀察目鏡的同時(shí),轉(zhuǎn)動(dòng)反光鏡使其朝向光源(自然光或燈光),使視野中的光線最明、均勻。如靠近光源,可用平面反光鏡,如距光源較遠(yuǎn),可用凹面反光鏡。根據(jù)所觀察的標(biāo)本,升降集光器和縮放光圈,以獲最佳光度。一般染色標(biāo)本用油鏡檢查時(shí),光度宜強(qiáng),可將光圈開(kāi)足,集光器上升至與載物臺(tái)相平;檢查未染色標(biāo)本用低倍鏡或高
倍鏡觀察時(shí),應(yīng)適當(dāng)縮小光圈,下降集光器,使光度減弱。
② 裝片 將標(biāo)本片放置在工作臺(tái)的夾持器中,用夾持起移動(dòng)標(biāo)本片至工作臺(tái)開(kāi)口中心(透光孔處)。
③ 調(diào)節(jié)焦距 通過(guò)旋轉(zhuǎn)粗調(diào)焦手輪,將載物臺(tái)升到最高限定位置(制片不能觸到物鏡),此時(shí)已準(zhǔn)備好調(diào)焦。使用4 倍或10 倍物鏡,在目視目鏡的同時(shí),旋轉(zhuǎn)粗調(diào)手輪,使工作臺(tái)緩慢下降,在目視目鏡中觀察到的清晰的圖像時(shí),再調(diào)節(jié)光闌聚光鏡孔,選擇與物鏡相匹配的孔,調(diào)節(jié)微調(diào)焦手輪,使視野中的圖像最清晰。用低倍鏡找出標(biāo)本的范圍,然后提高鏡筒,在標(biāo)本的待檢部位加一小滴香柏油,慢慢將油鏡頭浸于油中,但勿接觸玻片。然后,自目鏡處一面觀察,一面微轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器,使鏡筒徐徐上升,待看到模糊物象時(shí),改用細(xì)調(diào)節(jié)器調(diào)至物象清晰。如果是滴片標(biāo)本,先滴一滴標(biāo)本在玻片上,輕輕蓋上蓋玻片。加蓋玻片時(shí),先將蓋玻片的一邊與在玻片上的水滴邊緣接觸,然后自一側(cè)輕輕放下,先在低倍鏡下觀察,然后在高倍鏡下觀察,通過(guò)改變光圈的大小或轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)調(diào)焦手輪。
④ 還鏡 觀察完畢把鏡頭和載玻片上的油用3%乙醚擦凈。將低倍鏡轉(zhuǎn)成八字型.降下聚光器, 轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器,使鏡臺(tái)下移,以免接物鏡與集光器相碰受損。罩上鏡套,放回原處。
編輯:songjiajie2010

 
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