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微生物實(shí)驗(yàn)室菌株管理及使用

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2024-02-19  來源:網(wǎng)絡(luò)
核心提示: 菌株是微生物實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)工作中不可缺少的重要生物資源,常用于培養(yǎng)基驗(yàn)收、試驗(yàn)對(duì)照、人員培訓(xùn)考核、方法確認(rèn)等方面的質(zhì)量
 菌株是微生物實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)工作中不可缺少的重要生物資源,常用于培養(yǎng)基驗(yàn)收、試驗(yàn)對(duì)照、人員培訓(xùn)考核、方法確認(rèn)等方面的質(zhì)量控制。因此為了確保工作菌株的生物特性和純度、實(shí)現(xiàn)工作菌株方便快捷的使用及溯源,菌種的相關(guān)管理工作在微生物實(shí)驗(yàn)室就顯得尤為重要,按統(tǒng)一操作程序制備的菌株是微生物試驗(yàn)結(jié)果一致性的重要保證。今天小編就“微生物實(shí)驗(yàn)室菌株管理及使用”主題和大家做一個(gè)交流分享。

 

菌株管理及相關(guān)概念

1.幾個(gè)概念

標(biāo)準(zhǔn)菌株:即0代菌種,是指從官方菌種保藏機(jī)構(gòu)獲得并至少定義到屬或種的水平的菌株。實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)菌株應(yīng)有明確來源。

 

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株:從國內(nèi)或國外菌種保藏機(jī)構(gòu)獲得的標(biāo)準(zhǔn)菌株經(jīng)過復(fù)活并在適宜的培養(yǎng)基中生長后,即為標(biāo)準(zhǔn)貯備菌株。

 

儲(chǔ)存菌株:儲(chǔ)存菌株通常從凍干或超低溫保存的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)存菌株進(jìn)行制備。

 

工作菌株:標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株或儲(chǔ)存菌株經(jīng)繼代培養(yǎng)后得到的菌株。工作菌株不可替代標(biāo)準(zhǔn)菌株。

 

標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)物:標(biāo)準(zhǔn)菌株、標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株、工作菌株的統(tǒng)稱。

 

商業(yè)派生菌株:即用型與標(biāo)準(zhǔn)菌株所有相關(guān)特性等效的可以溯源的商業(yè)衍生物。常見的有定量工作菌株。

 

   2.標(biāo)準(zhǔn)菌株的獲取

藥品微生物檢驗(yàn)用的試驗(yàn)菌應(yīng)為有明確來源的標(biāo)準(zhǔn)菌株,或使用與標(biāo)準(zhǔn)菌株所有相關(guān)特性等效的可以溯源的商業(yè)派生菌株。

 

標(biāo)準(zhǔn)菌株應(yīng)來自認(rèn)可的國內(nèi)或國外菌種保藏機(jī)構(gòu)。中國藥典2020版以及國標(biāo)中涉及的菌株主要來自于兩大菌種保藏中心:中國醫(yī)學(xué)細(xì)菌保藏管理中心(CMCC)、美國標(biāo)準(zhǔn)菌種保藏中心(ATCC)。

 

菌株購買前需根據(jù)實(shí)驗(yàn)室檢測需求制定采購計(jì)劃,經(jīng)審批后,向認(rèn)可的國內(nèi)或國外的菌種保藏機(jī)構(gòu)購買標(biāo)準(zhǔn)菌株。標(biāo)準(zhǔn)菌株到達(dá)實(shí)驗(yàn)室后,菌種管理人應(yīng)檢查其名稱、數(shù)量以及每一支的完整性,同時(shí)將菌種的所有信息填寫記錄(包括菌種名稱、編號(hào)、數(shù)量、代數(shù)、來源、接收日期、接收人等),并將其貯存在規(guī)定溫度的冰箱里。

 

3.標(biāo)準(zhǔn)菌株的復(fù)蘇、復(fù)壯和保存

標(biāo)準(zhǔn)菌株的復(fù)蘇、復(fù)壯或培養(yǎng)物的制備應(yīng)按供應(yīng)商提供的說明或按已驗(yàn)證的方法進(jìn)行。復(fù)蘇、復(fù)壯應(yīng)選擇營養(yǎng)成分豐富且全面的培養(yǎng)基(例如:TSA/TSB/NA/NB/SDB/SDA等),一般不使用選擇性較強(qiáng)的培養(yǎng)基;特殊的一些菌株在普通的培養(yǎng)基上生長不好,可能還需添加生長因子。

 

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株應(yīng)進(jìn)行純度和特性確認(rèn)。純度確認(rèn)包括:平板劃線查看菌落形態(tài)、革蘭氏染色、顯微鏡觀察菌體形態(tài)等;關(guān)鍵特性確認(rèn)可選擇:特征生化反應(yīng)確認(rèn)、試劑盒鑒定、菌種鑒定儀鑒定等。需要注意的是,從開啟、復(fù)蘇、復(fù)壯到純度和特性的確認(rèn),都應(yīng)做好實(shí)驗(yàn)記錄。

 

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株保存時(shí),可將培養(yǎng)物等份懸浮于抗冷凍的培養(yǎng)基中,并分裝于小瓶中,藥典建議采用低溫冷凍干燥、液氮貯存、超低溫冷凍(低于-30℃)等方法保存。低于-70℃或低溫冷凍干燥方法可以延長菌種保存時(shí)間。菌種應(yīng)設(shè)專人管理,菌種保藏的地點(diǎn)應(yīng)采取一定的措施使非管理者不能輕易獲取,例如加鎖保管,雙人保管等。

 

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株可用于制備每月或每周1次轉(zhuǎn)種的工作菌株。冷凍菌種一旦解凍轉(zhuǎn)種制備工作菌株后,不得重新冷凍和再次使用。

 

從保藏機(jī)構(gòu)獲取的凍干菌種為0代菌種,每轉(zhuǎn)接一次增加一代(1代是指將活的培養(yǎng)物接種到微生物生長的新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng),任何形式的轉(zhuǎn)種均被認(rèn)為傳代一次),工作菌株的傳代次數(shù)應(yīng)嚴(yán)格控制,不得超過5代,以防止過度的傳代增加菌株變異的風(fēng)險(xiǎn)。


編輯:songjiajie2010

 
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