之前收到網(wǎng)友的提問，想根據(jù)GB/T 4789.6-2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 致瀉大腸埃希氏菌檢驗(yàn)》檢測產(chǎn)品，但是發(fā)現(xiàn)2016版與2003版檢測過程有所不同，對增加的PCR確認(rèn)試驗(yàn)的部分有所疑問。
   
標(biāo)準(zhǔn)中“6.5 PCR確認(rèn)試驗(yàn)”部分詳細(xì)介紹了PCR實(shí)驗(yàn)的基本過程和耗材要求，主要步驟包括菌落挑取、核酸提取、PCR反應(yīng)體系的配制、PCR循環(huán)條件、電泳、結(jié)果判定。
  對于經(jīng)常做PCR的實(shí)驗(yàn)員來說，按照標(biāo)準(zhǔn)操作就可以了。但是對于沒有做過PCR實(shí)驗(yàn)的小白，在拿到標(biāo)準(zhǔn)之后，應(yīng)該如何準(zhǔn)備試劑耗材？怎樣進(jìn)行實(shí)驗(yàn)?zāi)兀?/span>
  今天先來說一說4.28 Marker。
【原文】
   4.28 Marker:分子量包含 100bp、200bp、300bp、400bp、500bp、600bp、700bp、800bp、900bp、 1000bp、1500bp條帶。
  實(shí)驗(yàn)小白心里想：哦莫！PCR實(shí)驗(yàn)這么復(fù)雜嗎？光一個(gè)Marker試劑就要準(zhǔn)備這么多？不是說PCR比傳統(tǒng)的微生物培養(yǎng)好做嗎？果斷放棄……
Marker是啥？
  DNA Marker（也叫DNA Ladder）由特定分子量的雙鏈DNA片段組成，已混有含藍(lán)色染料的上樣緩沖液，適用于瓊脂糖凝膠電泳時(shí)作為DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)。
這么說太官方了，換個(gè)說法，Marker就相當(dāng)于一把尺子，是尺子就肯定有刻度，這個(gè)刻度就是不同大小的條帶。
聰明的你應(yīng)該也猜到了，其實(shí)標(biāo)準(zhǔn)中說的不同分子量的條帶其實(shí)是在同一個(gè)Marker里的。當(dāng)我們買回來一管Marker，這管Marker里就會(huì)有分子量不同的我們需要的條帶。
  Marker有不同的規(guī)格，常見的有DL2000、DL5000、DL15000、100bp DNA Ladder等。Marker在電泳之后，最后結(jié)果觀察時(shí)會(huì)呈現(xiàn)出如下圖的條帶。這些條帶就是“尺子”上的“刻度”。
  Marker的價(jià)格也不貴，而且每次上樣5μL就足夠，1mL的Marker也可以夠我們用很久很久了。
  便宜又好用，原來只需要準(zhǔn)備1支就可以，是不是長舒一口氣？
  只要嘗試過PCR實(shí)驗(yàn)，它的簡便快捷會(huì)超乎你想象!
  其實(shí)國外很多實(shí)驗(yàn)室早已經(jīng)用PCR的方法進(jìn)行微生物檢測，不僅通量高、準(zhǔn)確性還好，國內(nèi)很多標(biāo)準(zhǔn)也早已使用PCR的方法進(jìn)行檢測，畢竟誰不喜歡簡單又高效的檢測方法呢？
  希望今天的分享會(huì)對您的實(shí)驗(yàn)有所幫助。

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