熒光分子所處的外部化學(xué)環(huán)境對(duì)熒光強(qiáng)度有直接影響.選擇合適的條件不但可以使熒光加強(qiáng).提高測(cè)定的靈敏度.同時(shí).還可以控制干擾物質(zhì)的熒光產(chǎn)生.改善分析的選擇性。分了熒光分析法具有如下特點(diǎn):

(l)靈敏度高.山于是在黑背景下測(cè)定熒光發(fā)射強(qiáng)度一般而言，分子熒光分析法的靈敏度比紫外一可見吸收光洪分析法高2~4個(gè)數(shù)址級(jí).檢出限可達(dá)0.1--0.001ug.cm-3.
    (2)選擇性強(qiáng)。既可根據(jù)特征發(fā)射光譜，又可根據(jù)特征吸收光譜來鑒定物質(zhì)，還可以采用同步熒光光譜和時(shí)間分辨熒光光譜測(cè)量方法.進(jìn)一步提高選擇性。
    (3)試樣量少。分子熒光分析法的主要不足是應(yīng)用范圍小，這是由于本身能夠發(fā)射熒光的物質(zhì)及能形成熒光測(cè)量體系的物質(zhì)相對(duì)較少所致。另外，方法靈敏度高的同時(shí)受環(huán)境因素的影響也較大。
    2.定量依據(jù)與方法
    熒光強(qiáng)度If正比于吸收的光強(qiáng)度I8和熒光最子產(chǎn)率:

 

上式即為定貧的依據(jù)。常用的定量方法有標(biāo)準(zhǔn)曲線法和比較法。

當(dāng)被測(cè)物質(zhì)本身能夠產(chǎn)生熒光時(shí)。可通過直接側(cè)定熒光強(qiáng)度來確定該物質(zhì)的濃度。但大多數(shù)無機(jī)和有機(jī)化合物本身并不產(chǎn)生熒光或熒光量子產(chǎn)率很低而不能直接側(cè)定，此時(shí)，可采用間接側(cè)定法測(cè)定。間接測(cè)定法有兩種方式，一是通過化學(xué)反應(yīng)使非熒光物質(zhì)轉(zhuǎn)變成熒光物質(zhì)，如熒光標(biāo)記法;二是通過熒光猝滅法測(cè)定，即有些化合物具有使熒光體發(fā)生熒光猝滅的作用，熒光強(qiáng)度降低值與猝滅劑濃度成線性關(guān)系，可進(jìn)行定量分析.
 

3.應(yīng)用

無機(jī)化合物本身不產(chǎn)生熒光，可與有機(jī)熒光試劑配位構(gòu)成發(fā)光體系后測(cè)最，約可測(cè)盆 60多種元素。測(cè)定無機(jī)化合物時(shí)常用的幾種熒光試劑有:8一羥基喹琳、2一羥基一3一萘甲酸、 2.2幾二經(jīng)基偶氮苯及安息香等.被、鋁、翩、稼、硒、鎂、稀土金屬等元素的分析可采用普通熒光分析法。氛、硫、鐵、銀、鉆、鑲等元素可采用熒光碎滅法測(cè)定;鉻、妮、鈾、蹄等元素可采用低溫?zé)晒夥▊?cè)定。具有熒光特性的有機(jī)化合物、生物及藥物化合物可直接采用熒光分析法側(cè)定。目前熒光分析法已成為側(cè)定腎上腺素、青祥素、苯巴比妥、維生素、普魯卡因等藥物的靈敏測(cè)定方法。對(duì)于不產(chǎn)生熒光的菌族化合物，經(jīng)濃硫酸處理后，可使其不產(chǎn)生熒光的環(huán)狀醇類結(jié)構(gòu)變成能產(chǎn)生熒光的酚類結(jié)構(gòu).然后側(cè)定。對(duì)于多組分熒光物質(zhì)的測(cè)定，如果譜峰不相互重亞，則可分別測(cè)定;有部分重疊時(shí)，也可利用同步掃描方式，通過控制以來提高分辨率。

在分子熒光分析法中，利用激光誘導(dǎo)產(chǎn)生超高靈敏度，已能實(shí)時(shí)檢側(cè)到溶液中單分子的行為，如溶液中羅丹明6G分子、熒光索分子的單分子行為研究等.使該方面的研究工作受到廣泛關(guān)注。在生物和基因檢測(cè)方面，由于DNA自身的熒光盆子產(chǎn)率很低而不能直接檢測(cè)到，但以某些熒光分子作為探針，可通過探針標(biāo)記分子的熒光變化來研究DNA。典型的熒光探針為澳化乙錠(EB)，Tb3+、吖啶類熒光染料、釔的配合物等也被使用.在基因檢測(cè)方面.目前也已逐步采用熒光染料作為標(biāo)記物來取代同位素標(biāo)記物。