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無菌樣品的采集基本是為了支持、針對工廠的衛(wèi)生條件狀況的檢查結(jié)果。
檢驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作
1．包裝無菌取樣的工具：
擁有正確的采取產(chǎn)品或加工過程的無菌取樣器械工具是至關(guān)重要的。除非使用合適的采集工具，否則樣品的完整性會(huì)被懷疑，甚至樣品毫無意義。為了避免û有合適的取樣工具，建議建立一個(gè)無菌取樣的分析清單，來收集取樣工具。如果可能盛樣品的容器在最初進(jìn)入加工區(qū)之前應(yīng)當(dāng)被預(yù)先標(biāo)識，像樣品號、取樣日期、取樣人等。這樣可以使在不同的工廠條件下的樣品取樣更為方便一些。附加樣品號碼一般在樣品采集中被正式確定下來，因此不用預(yù)先標(biāo)明。人員的工具設(shè)施，象工作服、發(fā)網(wǎng)或消毒處理過的清潔的鞋靴必須具備有助于證明采集者û有污染到食物產(chǎn)品或樣品。
2．生產(chǎn)線樣品 In-Line Samples：
生產(chǎn)線樣品一般是指原材料，原料生產(chǎn)用水、包裝材料或其他任何使用在生產(chǎn)線的材料。
生產(chǎn)線樣品的采集一般用來確定細(xì)菌污染源是否來自于原材料或加工序中的某些地方。
3．環(huán)境樣品：
環(huán)境樣品用細(xì)菌拭子，（注：細(xì)菌拭子樣品不能給出/測出微生物的定時(shí)結(jié)果，因?yàn)闃悠贩浅Ｐ�，顯著微生物會(huì)經(jīng)常丟失），棉拭子的取樣部λ一般來自于食品接觸面，地板噴濺物。墻壁、頂部管道和檢驗(yàn)中考察的其他潛在污染源程序，并且記¼可能的聯(lián)系，在環(huán)境樣品來源和食物產(chǎn)品的污染方面，可以使樣品具有意義，并且是提倡這樣做的，例如：
地面噴濺水：工人從有地面污水的地方走過后又回到加工區(qū)域嗎？
墻壁：墻壁上面和在制品上面有昆害蟲嗎？
天花板：冷凝物或噴漆有無掉落到產(chǎn)品上或被發(fā)現(xiàn)與產(chǎn)品相接觸？
4．某些準(zhǔn)備
干冰：（有的稱為 gel backs）
如果使樣品在貯運(yùn)過程中保持冷卻，一些種類的制冷劑是必需的。檢查觀看干冰袋子是否有接觸，如果泄©可能污染樣品，你也可以用濕冰，濕冰可以由工廠提供，然而取樣前必須清楚這一點(diǎn)，如果想保持樣品冷凍，干冰應(yīng)在檢驗(yàn)前獲得。
盒子或制冷皿：
檢驗(yàn)員需要貯藏、運(yùn)輸他們的樣品，如果樣品不需冷凍，那ô用一個(gè)盒子即可，但如果樣品需要冷卻，一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的制冷皿或保溫箱是必須使用的，一般來講制冷皿隨帶著一個(gè)塑料袋，樣品可以放還袋子里，制冷劑象干冰，等可以放置在袋外，這樣樣品被冰污染的可能性就被避免了。
滅菌容器：
從塑料袋到滅菌的加侖漆桶，可以用于有銳利邊面的產(chǎn)品如蟹、蝦等。
取樣工具：
取樣工具包括：茶匙、角匙、尖嘴鉗、fovceps tongs 量筒和燒杯，工具的類型一般由取樣產(chǎn)品來決定。
所有取樣設(shè)施和容器的滅菌日期應(yīng)當(dāng)被檢查、滅菌時(shí)間應(yīng)當(dāng)在儀器設(shè)施的標(biāo)簽和包裝上標(biāo)明，一些儀器設(shè)施可以在當(dāng)?shù)貙?shí)驗(yàn)室滅菌處理或購買滅菌儀器，在當(dāng)?shù)貙?shí)驗(yàn)室滅菌的儀器設(shè)施一般可以保持至少兩個(gè)月，過期后設(shè)施必須重新滅菌。
滅菌手套：
滅菌手套在采樣中并非必須啟用，如果一個(gè)產(chǎn)品在樣品收集過程中必須被接觸，那ô最好讓工廠生產(chǎn)線的工人來做（加工處理產(chǎn)品的工人），將樣品放入收集容器中，既然工人在生產(chǎn)過程中處理接觸產(chǎn)品，那ô我們就不能認(rèn)為他們對產(chǎn)品又有附加的污染。
當(dāng)用手套時(shí)必須用一種避免污染的方式戴上，手套的大小必須適合工作的需要。
無菌棉拭子：
一般用于拭取儀器設(shè)施和工廠環(huán)境區(qū)域，使用棉拭子一般有一個(gè)正確的程序，打開棉拭子剝掉表皮，然后必須小心的放在試管頭上，注意不要沾染棉拭子的外端；下一步擦拭要取樣的部λ，像案板頭或頂部管道，然后從試管頭上小心翼翼地將拭子放入——將其全部堆入直到試管中部。
滅菌全包裝袋：
袋子必須購買滅菌的，使用時(shí)只需撕掉封頭，用提供的地方張開袋子，將樣品放入，然后將袋子頂端卷起，用線繩扎實(shí)牢；底部應(yīng)當(dāng)折疊兩次，以便線繩不會(huì)穿透塑料袋，導(dǎo)致樣品泄¶。當(dāng)樣品收集時(shí)，樣品采集時(shí)的條件例如產(chǎn)品的溫度、地點(diǎn)等，連同扦樣樣品號嘜頭，一并記¼入檢驗(yàn)員的注釋說明中，取樣的樣品可以從樣品號、采集日期、附加樣品號，最初調(diào)查人和其他鑒別信息事區(qū)分。
當(dāng)采集無菌樣品時(shí)，一條最重要的規(guī)則是：千萬別污染樣品。
這需要樣品采集人非常小心地采集所有附加樣品，確保不Υ反這條規(guī)則。
取樣方案
微生物檢驗(yàn)的特點(diǎn)是一個(gè)以小份樣品的檢測結(jié)果來說明一大批食品衛(wèi)生質(zhì)量，因此，用于分析的樣品的代表性至關(guān)重要，也即樣品的數(shù)量、大小和性質(zhì)對結(jié)果判定產(chǎn)生重大影響。要保證樣品的代表性首先要有一套科學(xué)的抽樣方案，其次使用正確的抽樣技術(shù)，并在樣品的保存和運(yùn)輸過程中保持樣品的原有狀態(tài)。
一般說來，進(jìn)出口ó易合同對食品抽樣量有明確規(guī)定的，按合同規(guī)定抽樣；進(jìn)出口ó易合同û有具體抽樣規(guī)定的，可根據(jù)檢驗(yàn)的目的，產(chǎn)品及被抽樣品批的性質(zhì)和分析方法的性質(zhì)確定抽樣方案。目前最為流行的抽樣方案為ICMSF 推薦的抽樣方案和隨機(jī)抽樣方案，有時(shí)也可參照同一產(chǎn)品的品質(zhì)檢驗(yàn)抽樣數(shù)量抽樣，或按單λ包裝件數(shù)N 的開平方值抽樣。無論采取何種方法抽樣，ÿ批貨物的抽樣數(shù)量不得少于5 件。對于需要檢驗(yàn)沙門氏菌的食品，抽樣數(shù)量應(yīng)適當(dāng)增加，最低不少于8件。
ICMSF 推薦的抽樣方案
ICMSF 的采樣設(shè)想及其基本方法用于分析所抽樣品的數(shù)量、大小和性質(zhì)對結(jié)果會(huì)產(chǎn)生很大影響。在某些情況下用于分析的樣品可能代表所抽“一批”（lot） 樣品的真實(shí)情況，這適合于可充分混合的液體，如牛奶和水。
在“多批”（ Lots 或“ batchers”）食品的情況下就不能如此抽樣，因?yàn)椤耙慌比菀装谖⑸锏馁|(zhì)量上差異很大的多個(gè)單元。因此在選擇抽樣方案之前，必須考慮諸多因素（ ICMSF，1986），包括：
——檢驗(yàn)?zāi)康模?br style="margin: 0px; padding: 0px; outline: 0px; max-width: 100%; box-sizing: border-box !important; overflow-wrap: break-word !important;" />
——產(chǎn)品及被抽樣品的性質(zhì)；
——分析方法；
ICMSF 提出的采樣基本原則，是根據(jù)（1）各種微生物本身對人的Σ害程度各有不同。（2）食品經(jīng)不同條件處理后，其Σ害度變化情況：①降低Σ害度；②Σ害度δ變；③增加Σ害度，來設(shè)定抽樣方案并規(guī)定其不同采樣數(shù)。目前，我國也已采用此法作為國家標(biāo)準(zhǔn)。在進(jìn)行詳細(xì)敘述之前，先解釋四個(gè)代號：
n：系指一批產(chǎn)品采樣個(gè)數(shù)。
c：系指該批產(chǎn)品的檢樣菌數(shù)中，超過限量的檢樣數(shù)，即結(jié)果超過合格菌數(shù)限量的最大允許數(shù)。
m：系指合格菌數(shù)限量，將可接受與不可接受的數(shù)量區(qū)別開。
M：系指附加條件，判定為合格的菌數(shù)限量，表示邊緣的可接受數(shù)與邊緣的不可接受數(shù)之間的界限。
1. ICMSF的采樣方法
有些實(shí)驗(yàn)室在ÿ批產(chǎn)品中，僅采一個(gè)檢樣進(jìn)行檢驗(yàn)，該批產(chǎn)品是否合格，全憑這個(gè)檢樣來決定。ICMSF方法與此不同，它是從統(tǒng)計(jì)學(xué)原理來考慮，對一批產(chǎn)品，檢查多少檢樣，才能夠有代表性，才能客觀地反映出該產(chǎn)品的質(zhì)量而設(shè)定的。
ICMSF方法中包括二級法及三級法兩種。二級法只設(shè)有n、с 及 m值，三級法則有 n、 c、m及M值。M即附加條件后判定合格的菌數(shù)限量。
（1）二級抽樣方案。自然界中材料的分布曲線一般是正態(tài)分布，以其一點(diǎn)作為食品微生物的限量值，只設(shè)合格判定標(biāo)準(zhǔn)m值，超過m值的，則為不合格品。
檢查在檢樣是否有超過m值的，來判定該批是否合格。以生食海產(chǎn)品魚為例n=5，c=0，m=102，n=5 即抽樣5個(gè)，c=0 即意ζ著在該批檢樣中，δ見到有超過m值的檢樣，此批貨物為合格品。
（2）三級抽樣方案。設(shè)有微生物標(biāo)準(zhǔn)m及M值兩個(gè)限量如同二級法，超過m值的檢樣，即算為不合格品。其中以m值到M值的范Χ內(nèi)的檢樣數(shù)，作為c值，如果在此范Χ內(nèi)，即為附加條件合格，超過M值者，則為不合格。例如：冷凍生蝦的細(xì)菌數(shù)標(biāo)準(zhǔn)n=5，c=3，m=101，M=102，其意義是從一批產(chǎn)品中，取5個(gè)檢樣，經(jīng)檢樣結(jié)果，允許≤3個(gè)檢樣的菌數(shù)是在m到M值之間，如果有3個(gè)以上檢樣的菌數(shù)是在m到M值之間或一個(gè)檢樣菌數(shù)超過M值者，則判定該批產(chǎn)品為不合格品。
（3）ICMSF 對食品中微生物的Σ害度分類與抽樣方案說明
為了強(qiáng)調(diào)抽樣與檢樣之間的關(guān)系，ICMSF已經(jīng)闡述了把嚴(yán)格的抽樣計(jì)劃與食品Σ害程度相聯(lián)系的概念（ICMSF，1986）。在中等或嚴(yán)重Σ害的情況下使用二級抽樣方案，對健康Σ害低的則建議使用三級抽樣方案。
ICMSF 是將微生物的Σ害度、食品的特性及處理?xiàng)l件三者綜合在一起進(jìn)行食品中微生物Σ害度分類的。這個(gè)設(shè)想是很科學(xué)的，符合實(shí)際情況的，對生產(chǎn)廠及消費(fèi)者來說都是比較合理的。下面結(jié)合表1加以說明。
注：表中“減少”系指食品經(jīng)加熱殺死污染的細(xì)菌。
“無變化”系指微生物數(shù)不增減例如冷凍食品或干燥食品。
“增加”系指將食品保存在不良環(huán)境中使微生物易于繁殖和產(chǎn)毒。
根據(jù)上表15種情況的舉例，1-3可用三級法，4-5可用二級法來判定是否合格。
考慮到以上15種情況，分別設(shè)定不同的取檢樣數(shù)及檢樣污染數(shù)，在1-9例種檢樣需采5個(gè)（n=5），而污染檢樣數(shù)設(shè)定為c=3，2，1。在10-15例用二級法則不得檢出該致病菌c=0。例如冷凍食品，細(xì)菌數(shù)按例2，大腸菌按例5，金黃色葡萄球菌按例8，沙門氏菌按例11的二級法判定。
對食品處理應(yīng)酌情考慮，例如生肉火腿中的金黃色葡萄球菌，被腐敗菌所抑制，不易發(fā)生食物中毒，適用例7和例8。烹調(diào)加工后的熟肉，對腐敗菌û有抵抗力，則易發(fā)生食物中毒，適用例9。加熱鹽腌的火腿，水分活性為0.86以下，金黃色葡萄球菌有增殖的可能性，因此適用例9。沙門氏菌水活性在0.94 以下不能繁殖，適用例11，如上所述，應(yīng)根據(jù)各種食品的Σ害度進(jìn)行設(shè)定。
ICMSF方法是以二級法、三級法和抽樣的概念為基礎(chǔ)，再將微生物的知識加進(jìn)來，則可以提出各種食品的微生物標(biāo)準(zhǔn)。如表2。
為了安全，冷凍生蝦加熱吃，減少Σ害度適用例1、4、10。冷凍加工蝦，為了不加熱就食，在解凍中有增強(qiáng)Σ害度的可能性，適用例3、6、9、12，對象微生物特別指定金黃色葡萄球菌腸毒素，兩者雖菌數(shù)限量是相同的，但情況有所不同，
分別適用c=3，c=1，因此不依靠菌數(shù)限量，而用合格率來控制。
（4）隨機(jī)抽樣方案
在現(xiàn)場抽樣時(shí)，可利用隨機(jī)抽樣表進(jìn)行隨機(jī)抽樣。隨機(jī)抽樣表系用計(jì)算機(jī)隨機(jī)編制而成，包括一萬個(gè)數(shù)字。其使用方法如下：
a.先將一批產(chǎn)品的各單λ產(chǎn)品（如箱、包、盒等）按順序編號。如將一批 600包的產(chǎn)品編為 1、 2…600。
b.隨意在表上點(diǎn)出一個(gè)數(shù)。查看該數(shù)字所在的行和列。如點(diǎn)在第48 行、第 10列的數(shù)字上。
c.根據(jù)單λ產(chǎn)品編號的最大λ數(shù)（如 A1，最大為三λ數(shù)），查出所在行的連續(xù)列數(shù)字（如 A2 所點(diǎn)數(shù)為第 48 行、第 10、11 和 12 列，其數(shù)字為 245），則編號與該數(shù)相同的那一份單λ產(chǎn)品，即為一件應(yīng)抽取的樣品。
d.繼續(xù)查下一行的相同連續(xù)列數(shù)字（如按A3、即第49 行的第10、11 和12列的數(shù)字，為608）。該數(shù)字所代表的單λ產(chǎn)品為另一件應(yīng)抽取的樣品。
e.依次按A4所述方法查下去。當(dāng)遇到所查數(shù)超過最大編號數(shù)量（如第50行的第10、11和12列的數(shù)字為931、大于600）則舍去此數(shù)，繼續(xù)查下一行相同列數(shù)，直到完成應(yīng)抽樣品件數(shù)為止。
抽樣方法
確定了抽樣方案以后，抽樣方法對抽樣方案的有效執(zhí)行和保證樣品的有效性代表性至關(guān)重要。抽樣必須遵循無菌操作程序，抽樣工具如整套不銹鋼勺子、鑷子、剪刀等應(yīng)當(dāng)高壓滅菌，防止一切可能的外來污染。容器必需清潔、干燥、防©、廣口、滅菌，大小適合盛放檢樣。抽樣全過程中，應(yīng)采取必要的措施防止食品中固有微生物的數(shù)量和生長能力發(fā)生變化。確定檢驗(yàn)批，應(yīng)注意產(chǎn)品的均質(zhì)性和來源，確保檢樣的代表性。常見的抽樣方法有：
1．直接食用的小包裝食品：
盡可能取原包裝，直到檢驗(yàn)前不要開封，以防污染。
2．統(tǒng)裝或大容器包裝的液體食品：
（1）抽樣前搖動(dòng)或用滅菌棒攪拌液體，盡量使其達(dá)到均質(zhì)；
（2）抽樣時(shí)應(yīng)先將抽樣用具浸入液體內(nèi)略加漂洗，然后再取所需量的樣品，裝人滅菌盛樣容器的量，不應(yīng)超過其容量的四分之三，以便于檢驗(yàn)前將樣品搖勻；
（3）取完樣品后，應(yīng)用消毒的溫度計(jì)插入液體內(nèi)測量食品的溫度，并作記¼。盡可能不用水銀溫度計(jì)測量，以防溫度計(jì)破碎后水銀污染食品；
（4）如為非冷藏易腐食品，應(yīng)迅速將所抽樣品冷卻至0-4℃。
3．統(tǒng)裝或大容器包裝的固體和固體食品：
（1）ÿ份樣品應(yīng)用滅菌抽樣器由幾個(gè)不同部λ采取，一起放入一個(gè)滅菌容器內(nèi)；
（2）注意不要使樣品過度潮濕，以防食品中固有的細(xì)菌增殖。
4．統(tǒng)裝或大容器包裝的冷凍食品
（1）對大塊冷凍食品，應(yīng)從幾個(gè)不同部λ用滅菌工具抽樣，使之有充分的代表性。
（2）在將樣品送達(dá)實(shí)驗(yàn)室前，要始終保持樣品處于冷凍狀態(tài)。樣品一旦融化，不可使其再凍，保持冷卻即可。
5．生產(chǎn)過程中的抽樣：
（1）劃分檢驗(yàn)批次，應(yīng)注意同批產(chǎn)品質(zhì)量的均一性；
（2）如用固定在貯液桶或流水作業(yè)線上的抽樣龍頭抽樣時(shí)，應(yīng)事先將龍頭消毒；
（3）當(dāng)用自動(dòng)抽樣器取不需要冷卻的粉狀或固定食品時(shí)，必須履行相應(yīng)的管理辦法，保證產(chǎn)品的代表性不被人為地破壞。
樣品的標(biāo)記、保存和運(yùn)送
抽樣過程中應(yīng)對所抽樣品進(jìn)行及時(shí)、準(zhǔn)確的標(biāo)記；抽樣結(jié)束后，應(yīng)有抽樣人寫出完整的抽樣報(bào)告，使樣品盡可能保持在原有條件下迅速發(fā)送到實(shí)驗(yàn)室。
1．樣品的標(biāo)記
（1）所有盛樣容器必須有和樣品一致的標(biāo)記。在標(biāo)記上應(yīng)記明產(chǎn)品標(biāo)志與號碼和樣品順序號以及其他需要說明的情況。標(biāo)記應(yīng)牢固，具防水性，字跡不會(huì)被擦掉或脫色。
（2）當(dāng)樣品需要托運(yùn)或由非專職抽樣人員運(yùn)送時(shí)，必須封識樣品容器。
2.樣品的保存和運(yùn)送
（1）抽樣結(jié)束后應(yīng)盡快將樣品送往實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)。如不能及時(shí)運(yùn)送，冷凍樣品應(yīng)存放在-15℃以下冰箱或冷藏庫內(nèi)；冷卻和易腐食品存放在 0-4℃冰箱或冷卻庫內(nèi)；其他食品可放在常溫冷暗處。
（2）運(yùn)送冷凍和易腐食品應(yīng)在包裝容器內(nèi)加適量的冷卻劑或冷凍劑。保證途中樣品不升溫或不融化。必要時(shí)可于途中補(bǔ)加冷卻劑或冷凍劑。
（3）如不能由專人攜帶送樣時(shí)，也可托運(yùn)。托運(yùn)前必須將樣品包裝好，應(yīng)能防破損，防凍結(jié)或防易腐和 冷凍樣品升溫或融化。在包裝上應(yīng)注明“防碎”、“易腐”、“冷藏”等字樣。
（4）作好樣品運(yùn)送記¼，寫明運(yùn)送條件、日期、到達(dá)地點(diǎn)及其他需要說明的情況，并由運(yùn)送人簽字。
