1.HPLC對(duì)流動(dòng)相的一般要求

流動(dòng)相就比如人體的血液，其質(zhì)量直接影響到整個(gè)系統(tǒng)的正常運(yùn)行與否。

（1）應(yīng)該使用HPLC級(jí)的溶劑，不能互相混溶的溶劑不可以直接切換！一般在水相和與其不混溶的溶劑切換時(shí)，使用異丙醇作為過渡溶劑。

（2）注意溶劑的截止波長。截止波長是指該溶劑可以在紫外檢測器中使用的最低波長,低于該波長后,溶劑會(huì)有很強(qiáng)的紫外吸收，從而影響極限的穩(wěn)定性、干擾對(duì)所分析物質(zhì)的檢測。

（3）HPLC所使用的水必須是新鮮的和經(jīng)過0.45μm濾膜過濾過的。建議每天更換新鮮的水。長期不用時(shí)，必須把使用水的管路用有機(jī)溶劑置換，防止長霉。

（4）儀器使用完后要采用適當(dāng)?shù)娜軇�沖洗等方法維護(hù)色譜柱和系統(tǒng)。如果使用了緩沖鹽一定先將鹽要沖洗干凈。

（5）儀器長期不用時(shí)，不建議使用純乙腈封存。因?yàn)橐译嬗猩�成聚合物的趨勢。建議使用甲醇、甲醇/水或乙腈/水封存。

（6）當(dāng)有流路堵塞時(shí)，可以嘗試將之反接后沖洗。污染的溶劑或溶劑瓶里的藻類生長將會(huì)縮短溶劑過濾器的使用壽命，并且影響泵和系統(tǒng)的的性能。這在水溶劑或磷酸鹽緩沖液(pH4至7)中尤其如此。

2.泵的使用要點(diǎn)

（1）將裝有溶劑瓶的溶劑箱放在泵上面或較高處。當(dāng)在四元泵上使用鹽溶液或有機(jī)溶劑時(shí)，建議將鹽溶液接在下面的梯度閥口上，將有機(jī)溶劑接在上面的梯度閥口上，有機(jī)溶劑通道最好在水或鹽溶液通道的正上面。建議用水定期沖洗所有MCGV通道除去可能在閥口析出的鹽結(jié)晶。

（2）操作泵之前，用至少兩個(gè)體積（標(biāo)準(zhǔn)脫氣機(jī)30mL，對(duì)微脫氣機(jī)10mL）沖洗真空脫氣機(jī),特別是當(dāng)泵關(guān)閉了一段時(shí)間后(例如，過夜)，以及在通道中使用揮發(fā)性混合溶劑時(shí)，防止溶劑瓶內(nèi)的玻璃濾頭(過濾器)堵塞及長菌，當(dāng)濾頭表面有黑色或黃色污染層說明發(fā)生了堵塞，應(yīng)立即清洗或更換。

（3）定期檢查排液閥的過濾白頭。檢查方法：擰開排液閥，以水作流動(dòng)相。    

（4）對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)脫氣機(jī)(G1322A)來說,流速為5mL/min水，若壓力大于10bar，則建議更換。 

（5）對(duì)于微量脫氣機(jī)(G1379A)來說,流速為2mL/min水，若壓力大于5bar，則建議更換。

（6）當(dāng)使用低流速時(shí)，檢查所有1/16英寸接頭有無滲漏（用壓力測試或漏液測試。每當(dāng)更換泵密封墊時(shí)排液閥慮芯也應(yīng)更換。

（7）更換活塞密封墊時(shí)檢查活塞桿上是否有劃痕。有劃痕的活塞將導(dǎo)致輕度滲漏，并降低密封墊的使用壽命。應(yīng)盡早更換有劃痕的活塞。

（8）使用緩沖溶液時(shí)，關(guān)泵前先用水沖洗系統(tǒng)。當(dāng)需要長時(shí)間使用0.1摩爾或更高濃度的緩沖液時(shí)，最好選用密封墊清洗附件，以減少對(duì)密封墊及活塞桿的磨損。

（9）如果使用了高濃度的緩沖鹽，可以考慮用熱水（50－60℃）來沖洗鹽通道來確保沒有緩沖鹽殘留在系統(tǒng)中。

（10）更換活塞密封墊后應(yīng)按照密封墊安裝步驟對(duì)其進(jìn)行磨合，但磨合不適用于正相密封墊。

（11）當(dāng)泵頭安裝有柱塞清洗附件時(shí)，由于該附件中也有密封墊，這樣就會(huì)增加活塞桿運(yùn)動(dòng)時(shí)的阻力。所以開泵前一定要用10％異丙醇，并將其流速調(diào)至約2－3滴/分鐘使溶液流過沖洗裝置。(對(duì)于二元泵SL，如果不使用鹽溶液可以不開)10％異丙醇有助于降低水的表面張力，并有抑菌作用。不要用其它溶劑代替。

當(dāng)泵頭安裝有沖洗附件而不開啟10％異丙醇，會(huì)使密封墊及活塞桿的壽命減短(二元泵SL除外)，泵頭如果發(fā)出“吱吱”聲不影響使用和泵的精度如果有必要，可以改變壓縮因子（compressibility）來達(dá)到更好的效果。

3. 自動(dòng)進(jìn)樣器

（1）樣品在進(jìn)樣前必須經(jīng)過適當(dāng)?shù)念A(yù)先處理，需要經(jīng)過亞微米濾膜的過濾或者離心，防止樣品中的微小顆粒堵塞管路，最好使用流動(dòng)相作為溶劑配制樣品，所用溶劑應(yīng)該對(duì)樣品有較好的溶解性。

（2）針座是喇叭口朝上暴露在空氣中的，有時(shí)空氣中的較大灰塵顆粒可能恰好落在針座的流路內(nèi)而引起針座的堵塞。這時(shí)候可以嘗試卸下針座，將它接在泵的出口上反沖，一般能解決問題。

（3）如果經(jīng)常使用緩沖溶液，除了泵頭之外，ALS計(jì)量泵的柱塞及密封圈，六通閥的轉(zhuǎn)子密封圈和定子密封圈應(yīng)該定期清洗，防止有鹽的顆粒磨損ALS一定要使用Agilent的樣品瓶及瓶蓋；使用不兼容的或者加工精度差的樣品瓶及瓶蓋會(huì)引起ALS故障率的增加及性能的降低。

4. DAD常見故障及維護(hù)

（1）故障

（2）HPLC日常維護(hù)

（3） HPLC常見故障診斷