以引起羅非魚鏈球菌病的無乳鏈球菌為對象，利用4種常用消毒劑和5種抗生素藥品作對比試驗(yàn)，探究防治鏈球菌病的最適外潑消毒劑和內(nèi)服藥。

 

    羅非魚作為世界水產(chǎn)行業(yè)最主要的養(yǎng)殖品種之一，具有生長速度快、食性雜、肉質(zhì)好、營養(yǎng)價(jià)值高、繁殖能力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)廣泛分布于熱帶亞熱帶的淡咸水域中。我國沿海地區(qū)特別是海南、廣東、福建、廣西等省份養(yǎng)殖的羅非魚產(chǎn)量占世界一半以上。

 

    近年來，伴隨著羅非魚養(yǎng)殖面積和養(yǎng)殖密度越來越高，由無乳鏈球菌(Streptococcus agalactiae)感染引起的羅非魚鏈球菌病已經(jīng)成為阻礙我國羅非魚養(yǎng)殖業(yè)健康持續(xù)發(fā)展的主要因素。特別是自2009年以來羅非魚“鏈球菌病”呈現(xiàn)全國暴發(fā)的趨勢，在每年的高溫季節(jié)尤其是7-9月份，發(fā)病率在50%以上，死亡率最高可達(dá)80%以上。

 

    目前羅非魚“鏈球菌病”缺乏安全高效的防控措施，雖然使用一定量的抗生素能在某些程度上抑制該病的暴發(fā)，但是隨著無乳鏈球菌耐藥性的增加，該病存在比較嚴(yán)重的停藥反彈的現(xiàn)象。每年由于羅非魚出口藥物殘留超標(biāo)造成羅非魚出口受阻、國內(nèi)滯銷、魚價(jià)低迷給我國整個(gè)羅非魚產(chǎn)業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。尋找安全高效的的羅非魚“鏈球菌病”防控方法是目前眾多水產(chǎn)養(yǎng)殖者急需解決的問題。

 

一、樣品的采集與診斷

 

    2015年10月，在福建省云霄縣常山下坂某養(yǎng)殖場暴發(fā)羅非魚“鏈球菌病”，規(guī)格在20cm左右，表現(xiàn)為典型的“鏈球菌病”癥狀�；疾◆~體表發(fā)黑在池邊漫游打轉(zhuǎn)，攝食減少，眼球突出渾濁，體表、鰓蓋和下頜等處充血出血，尾鰭鑲白邊，肝臟、膽囊、脾臟充血腫脹嚴(yán)重時(shí)糜爛，腸道和腹腔中充滿淡黃色積水，爛鰓并且潰爛部位附著污泥，鰓蓋內(nèi)側(cè)淤血，顯微觀察發(fā)現(xiàn)鰓絲表面有少許車輪蟲和指環(huán)蟲，鰓絲存在壞死灶，鰓小片毛細(xì)血管擴(kuò)張出現(xiàn)充血現(xiàn)象，在鰓絲動脈中發(fā)現(xiàn)氣泡。

 

二、病原分離純化與鑒定

 

    使用70%的酒精棉球?qū)�患病魚體表進(jìn)行擦拭消毒后進(jìn)行解剖，用火焰灼燒過的接種環(huán)挑取少許肝臟組織于BHI固體培養(yǎng)基上進(jìn)行劃線，37℃培養(yǎng)18h。根據(jù)培養(yǎng)結(jié)果挑取優(yōu)勢菌落重新進(jìn)行劃線，同樣條件培養(yǎng)后在BHI培養(yǎng)基中進(jìn)行劃線純化。將純化后的病原菌在BHI液體培養(yǎng)基中37℃，200r/min培養(yǎng)18h后將菌液送往生物公司進(jìn)行測序后經(jīng)過比對得知為無乳鏈球菌。

 

三、藥敏實(shí)驗(yàn)

 

    使用4種常用消毒劑和5種抗生素藥品作為對比實(shí)驗(yàn)，選取福爾馬林（有效成分：37%-40%甲醛）、衛(wèi)捷（有效成分：戊二醛、苯扎溴銨）、綠安（有效成分：月芐三甲氯銨）、金碘（有效成分：聚維酮碘）4種常見消毒藥和磺胺嘧啶鈉（有效成分：磺胺嘧啶鈉）、呋喃西林（有效成分：呋喃西林）、強(qiáng)力泰（有效成分：恩諾沙星）、呼樂芬（有效成分：氟苯尼考）、魚血安（有效成分：鹽酸環(huán)丙沙星、鹽酸小檗堿）5種抗生素，使用牛津杯法進(jìn)行藥敏實(shí)驗(yàn)。

 

    吸取100μL培養(yǎng)后的病原菌液均勻涂布于使用BHI固體培養(yǎng)上，然后吸取雙蒸水稀釋后的不同消毒藥（1%）100μL打入牛津杯中，共做3個(gè)平行。

 

    將5種抗生素各稱取0.2g溶于50ml雙蒸水中，配制成4g/L濃度的溶液。吸取100μL培養(yǎng)后的病原菌液均勻涂布于BHI固體培養(yǎng)基上，吸取100μL相應(yīng)的抗生素溶液于牛津杯中，連續(xù)做3個(gè)平行，37℃培養(yǎng)18h后觀察抑菌效果。

 

    本實(shí)驗(yàn)分離出的羅非魚鏈球菌病原菌在4種消毒劑（編號1-4）的對比中，對福爾馬林最為敏感，抑菌圈直徑在37mm左右，其次是衛(wèi)捷和綠安，抑菌圈直徑在24mm左右，通過3組實(shí)驗(yàn)表明金碘對病原菌并不敏感，抑菌效果不明顯。

 

    在5種抗生素（編號5-9）的對比實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，病原菌對魚血安最為敏感，抑菌圈直徑為34mm左右，強(qiáng)力泰、呼樂芬次之，抑菌圈直徑30mm左右， 最后是呋喃西林，抑菌圈直徑27mm左右，某些養(yǎng)殖戶常用的磺胺嘧啶鈉對無乳鏈球菌沒有抑菌效果。

 

 

四、防治意見

 

    羅非魚“鏈球菌病”給養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)帶來了巨大危害，一直都是困擾養(yǎng)殖戶的重大難題，目前仍未找到有效的方法來控制和治療該疾病。本文通過藥敏實(shí)驗(yàn)篩選了一種水體消毒劑和一種合適的內(nèi)服藥來對羅非魚鏈球菌病進(jìn)行防治，以減少養(yǎng)殖戶的經(jīng)濟(jì)損失。通過對4種常見消毒劑福爾馬林、衛(wèi)捷、綠安、金碘的藥敏結(jié)果發(fā)現(xiàn)福爾馬林的抑菌效果最強(qiáng)，衛(wèi)捷和綠安的效果基本一致，金碘抑菌效果不明顯。福爾馬林雖然抑菌效果最強(qiáng)但是對人體及羅非魚具有一定毒副作用，安全性方面相對于衛(wèi)捷或綠安略有差距。因此綜合考慮對于外潑消毒劑以衛(wèi)捷或綠安最為合適。

 

    通過對5種抗生素藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果對比發(fā)現(xiàn)病原菌對魚血安最敏感，強(qiáng)力泰、呼樂芬次之，呋喃西林抑菌效果遠(yuǎn)不如前三者，且該抗生素屬于人工合成的一類硝基呋喃類的廣譜抗菌藥物，近些年來發(fā)現(xiàn)呋喃類的藥物對人體具有潛在的致突變和致癌性，因此不推薦使用。磺胺嘧啶鈉作為一種磺胺類藥物是早些年羅非魚“鏈球菌病”防治的特效藥，隨著“鏈球菌病”的大量暴發(fā)某些養(yǎng)殖戶頻繁使用該類藥品，造成鏈球菌對磺胺類藥物產(chǎn)生極強(qiáng)的耐藥性。

 

    本文通過藥敏實(shí)驗(yàn)得知，磺胺嘧啶鈉對無乳鏈球菌沒有產(chǎn)生任何抑菌效果。這與該地區(qū)的某些養(yǎng)殖戶在羅非魚“鏈球菌病”暴發(fā)的時(shí)候投入大量磺胺類藥物沒有產(chǎn)生應(yīng)有治療的效果相符合。其他3種抗生素魚血安、強(qiáng)力泰和呼樂芬，由于安全性高，可以作為防治羅非魚鏈球菌的內(nèi)服藥，根據(jù)抑菌效果建議優(yōu)先選擇魚血安。

 

    通過實(shí)地觀察該羅非魚養(yǎng)殖場水質(zhì)過濃溶氧過高導(dǎo)致羅非魚患“氣泡病”，潛在增加羅非魚的死亡率，因此建議潑灑二氧化氯進(jìn)行消毒，以抑制藻類過度繁殖造成水體中溶氧過高。在鰓絲上發(fā)現(xiàn)少許的車輪蟲及指環(huán)蟲由于數(shù)量不多可以使用阿維菌素等刺激性小的殺蟲藥進(jìn)行全池潑灑以抑制車輪蟲及指環(huán)蟲的生長，起到預(yù)防作用。

 

作者：福建大北農(nóng)水產(chǎn)科技有限公司 秦波 郭超藍(lán)