(1)滅菌不徹底:培養(yǎng)料滅菌不徹底會(huì)造成雜菌污染,一般3-5天即可出現(xiàn)污染現(xiàn)象。而滅菌不徹底也是由于下列幾個(gè)原因引起的:
①霉菌操作不當(dāng):一般雜菌的菌絲體與孢子經(jīng)過(guò)常壓100℃、6-8小時(shí)或121℃、0.5-2小時(shí)均能殺死。目前食用菌培養(yǎng)料往往采用常壓滅菌法或高壓滅菌法。常壓滅菌對(duì)谷粒、糞草等材料的滅菌難度較大,不容易完全達(dá)到滅菌的效果;而高壓滅菌法效果則要好得多。采用高壓滅菌時(shí),關(guān)鍵是把鍋內(nèi)冷空氣排盡,否則,鍋內(nèi)不能達(dá)到飽和的蒸汽壓,滅菌的溫度也達(dá)不到要求。采用常壓滅菌時(shí),滅菌倉(cāng)的周?chē)詈闷龀蓤A形,以便灶內(nèi)升溫均勻,灶頂砌成圓拱形,這樣冷凝水沿四壁下流而不會(huì)打濕菌種瓶(袋)。另外蒸汽不足、溫度不高等也是常壓滅菌不徹底的因素。
②培養(yǎng)料性質(zhì)的影響:制種所需材料的種類(lèi)、培養(yǎng)料中的含菌量、含水量以及酸堿度等都能影響滅菌效果。滅菌時(shí),要根據(jù)培養(yǎng)料配方的不同,選擇相應(yīng)的滅菌時(shí)間。選用的培養(yǎng)料一定要新鮮無(wú)霉變。從培養(yǎng)料滅菌前微生物含量來(lái)看,微生物數(shù)量越高則滅菌時(shí)間越長(zhǎng),反之則短,所以培養(yǎng)料配制完畢后必須及時(shí)滅菌,裝袋后的菌種千萬(wàn)不要過(guò)夜后再上鍋滅菌,以免微生物大量繁殖,導(dǎo)致料內(nèi)的含菌量升高,并且會(huì)造成料中營(yíng)養(yǎng)損失。水的熱傳導(dǎo)性能比木屑、糞草等固體要強(qiáng),如果培養(yǎng)料內(nèi)水分均勻適宜,則滅菌效果好。培養(yǎng)料中應(yīng)避免出現(xiàn)"夾心料"(即培養(yǎng)料中含有未吸水的干料)。滅菌鍋內(nèi)的蒸汽對(duì)夾心料的穿透能力較弱,容易出現(xiàn)滅菌死角,達(dá)不到滅菌的目的。另外,培養(yǎng)料的酸堿度也影響滅菌的效果,偏酸的培養(yǎng)料比中性和偏堿性的滅菌時(shí)間要短。
③菌種瓶(袋)堆放不當(dāng):菌種瓶(袋)在滅菌鍋內(nèi)的堆放形式可影響滅菌的效果。在排放時(shí)要留有一定的空隙,以便蒸汽的流通和升溫。對(duì)菌種袋裝的培養(yǎng)料滅菌時(shí),由于塑料袋受熱后容易變形變軟,如裝料不緊,疊壓堆放時(shí)則菌袋之間的空隙會(huì)減少,影響滅菌的效果。
④菌種瓶或菌種袋的影響:制種時(shí)一般選擇菌種瓶或菌種袋。塑料袋傳熱速度快,而玻璃瓶則傳熱速度慢,在相同培養(yǎng)料,使用相同的滅菌方法時(shí),瓶裝料要比袋裝料滅菌時(shí)間稍長(zhǎng)一些。另外,個(gè)別容器密封不嚴(yán)或細(xì)小破損,也可以導(dǎo)致雜菌的污染。
(2)接種操作不規(guī)范:食用菌接種過(guò)程需要嚴(yán)格的無(wú)菌操作,如操作不規(guī)范則極易造成培養(yǎng)料的雜菌污染。污染的雜菌一般是接種室空氣中雜菌、菌袋表面的雜菌以及接種人員的體表雜菌等。操作不規(guī)范引起培養(yǎng)料污染的特點(diǎn),是雜菌在培養(yǎng)料表面生長(zhǎng),一般發(fā)生在菌袋開(kāi)口處以及接種處。因此必須要嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)程,接種室要用"菌室專用消毒王"進(jìn)行嚴(yán)格的消毒處理。
(3)菌種帶雜菌:用于擴(kuò)大培養(yǎng)的原種本身必須是純菌,這樣才能保證菌種的單一性。如果菌種本身不純,可造成批量污染,生產(chǎn)中的一批菌種中,集中在一起的菌種都出現(xiàn)污染,而且污染的部位在菌種塊處,污染出現(xiàn)較早,接種3-5天即可出現(xiàn)。因此我們?cè)谥品N時(shí)應(yīng)盡量采用生活力強(qiáng)、菌齡適宜、抗逆性強(qiáng)的優(yōu)良菌種原種。
(4)培養(yǎng)室不潔凈:培養(yǎng)料不潔凈、空氣不流通、室內(nèi)潮濕,也可感染雜菌。這種情況下污染率相對(duì)較低,但隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),污染率會(huì)逐漸增加。大量污染出現(xiàn)比較晚,一般在接種10天后出現(xiàn)。