一、用帖壁法純化巨噬細胞

1．用含20％～40％小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液將巨噬細胞配成2×106～4×106/ml的濃度。以每平方厘米2×105～4×105個巨噬細胞的密度將細胞懸液接種到玻璃培養(yǎng)皿（瓶）或塑料培養(yǎng)皿（瓶）中。37℃ 5％ CO2的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1小時或24小時。1小時培養(yǎng)節(jié)省時間但會丟失一些粘附力弱的巨噬細胞，而24小時可以得到較多的巨噬細胞。20％～40％的小牛血清可以減少B淋巴細胞的粘附。

2．搖晃培養(yǎng)皿（瓶），懸浮未粘附細胞，吸出細胞懸液。用預(yù)溫的Hanks液洗滌細胞3～4次。懸浮細胞可重復(fù)粘附，得到更多巨噬細胞。用適量含2.5mmol/L EDTA的無鈣鎂Hanks液消化細胞37℃ 15～30分鐘。用吸管吹打分離細胞，離心250×g 10分鐘，去上清液。

3．用預(yù)冷的Hanks液洗滌細胞3～4次，每次離心250×g 10分鐘，去上清液。最后用含10％小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液懸浮細胞，臺盼藍染色計數(shù)細胞并決定細胞活力，將細胞配成所需的濃度。

二、用不連續(xù)密度梯度離心純化巨噬細胞

1．取15ml離心管，將制備好的各濃度密度梯度材料按下濃上淡的順序依次分層加在離心管中，每個濃度2ml。最后加上上述巨噬細胞懸液3～5ml（約含2×107～5×107細胞）。

2．4℃中，水平離心1000×g 30分鐘，垂直取出離心管，小心吸出各交界面的細胞。分別用預(yù)冷的含1％小牛血清RPMI-1640培養(yǎng)液洗滌各交界面細胞2次，每次200×g 10分鐘。用含10％小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液將細胞配成所需的濃度。