上樣緩沖液的問題:
上樣緩沖液配多少濃度雙較合適,這個(gè)問題是很重要的。因?yàn)檫@里涉及到上樣量的問題。
如果上樣孔只能上樣30ul。而樣本中蛋白較少,要上樣25ul才有可能做出蛋白條帶。這個(gè)時(shí)候就要用到高倍上樣緩沖液。以下是6倍緩沖液的配方:
6*SDS凝膠上樣緩沖液:
300mM/L tris-HCl(pH6.8)
600mM/L DTT
12%SDS
0.6%溴酚藍(lán)
60% 甘油
此外,提高上樣量還有一個(gè)辦法。就是在上樣緩沖液和樣品混合煮的時(shí)候開蓋,這樣可以使一部分水份蒸發(fā),從而提高上樣量。