（一）試劑及配制

1．飽和硫酸銨液

2．各種磷酸鹽緩沖液

⑴ 0.2mol/L原液

A液：0.20Mol/L NaH2PO4液

NaH2PO4·H2O 31.20g

H2O 1 000ml

B液：0.20Mol/L Na2HPO4液

Na2HPO4·12H2O 71.7g

H2O 1 000ml

⑵ 0.10Mol/L pH8.0PB液
A液： 53ml

B液： 947ml

H2O 加至 2 000ml

⑶ 0.005Mol/L pH8.0 PB液

取0.10Mol/L pH8.0 PB液100ml，加H2O至2 000ml

⑷0.025 Mol/L pH8.0 PB液

取0.10Mol/L pH8.0 PB液500ml，加水至2 000ml。

⑸ 0.035 Mol/L pH8.0 PB液

取0.10.1 Mol/L pH8.0 PB液700ml，加水至2 000ml。

⑹ 0.10Mol/L pH5.8PB液

A： 920ml

B： 80ml

H2O 加至 2 000ml

⑺ 0.40Mol/L pH5.2pB液

a液.0.40Mol/L NaH2PO4液

NaH2PO4·2H2O 62.40g

H2O 加至 1 000ml

B液.0.40Mol/L Na2HPO4液

Na2HPO4·12H2O 143.4g

H2O 加至 1 000ml

取a液 960ml

b液 40ml

混合即可。

⑻ 0.01 Mol/L pH8.0PBS液

取0.10Mol/L pH8.0 PB液 100ml

NaCl 8.20g

H2O 加至 1 000ml

3．DEAE-纖維素(細(xì)粒級(jí))

4．SephadexG200

（二）操作方法

1．取一定量的血清，加等量的生理鹽水，然后逐漸滴加飽和硫酸銨溶液，使成40％的飽和度,靜置30min。

2．10 000r/min離心10min，去上清。

3．加入一定量的生理鹽水，使沉淀溶解，再加入飽和硫酸銨溶液，使成40％飽和度。10 000r/min離心10min，去上清。

4．再重復(fù)步驟3一次。

5．將沉淀以少量生理鹽水溶解，透析，除鹽濃縮。

6．制備DEAE-纖維素柱，以0.005Mol/L pH8.0PB液平衡。

同時(shí)制備SephadexG200凝膠柱，以0.01Mol/L pH8.0PBS液平衡并進(jìn)行洗脫。

7．以0.005Mol/L pH8.0PB液洗脫，得蛋白液為IgG。

7． 以0.025 Mol/L pH8.0PB液洗脫，得蛋白主要是IgE，再過SephadexG200凝膠柱，收集第一峰即為純IgE。

8． 以0.035 Mol/L pH8.0PB液洗脫，得蛋白主要是IgA，再過SephadexG200凝膠柱，收集第一峰即為純IgA。

10．以0.10Mol/L pH5.8PB液洗脫，洗脫液主要有IgM、IgG及白蛋白的混雜物。

11．以0.40Mol/L pH5.2PB液洗脫，得蛋白液主要是IgM。過SephadexG200，收集第二峰即為純IgM。