用檢測抗體的方法從雜交細(xì)胞中篩選出生產(chǎn)指定抗體的雜交株是很重要的。檢測抗體的方法很多，從沉淀反應(yīng)到放射免疫測定。由于細(xì)胞培養(yǎng)液中的抗體濃度通常是很低的，而且傳統(tǒng)的檢測方法多是以多價抗原與多克隆抗血清相反應(yīng)。雜交瘤產(chǎn)生的抗體則是單克隆的，所以并不是每項方法都能適用。一定要選擇敏感的、快速的、一次又能檢測多份樣品的方法。常用的檢測方法如下：

１．試管溶血反應(yīng)檢測法

（1）材料：①雜交瘤細(xì)胞，換液后至少兩天才收取培養(yǎng)液；②綿羊紅血球，洗滌三次后，配成1％懸液；③豚鼠補(bǔ)體，無菌采取補(bǔ)體，以pH7.2PBS稀釋成20％溶液，分裝小瓶，于﹣40℃保存。使用時以補(bǔ)體和壓積紅血球5:1（V/V）的量進(jìn)行吸收，4℃30min，然后2 000r/min離心10min，去紅血球，取上清液備用；④0.01Mol/L pH7.2PBS液。

（2）操作方法：①在小試管中，加入0.1ml雜交瘤細(xì)胞用過的培養(yǎng)液，再加入0.1ml pH7.2的PBS液，然后倍比稀釋至一定的稀釋度；②加入0.1ml補(bǔ)體和1％綿羊紅血球0.1ml，混勻后置37℃水浴1h；③觀察結(jié)果，以綿羊紅血球完全溶解的雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)液的最高稀釋倍數(shù)為抗體的溶血效價。

2．斑點檢測法 抗紅血球表面的單克隆抗體與澆灌在瓊脂板的紅血球結(jié)合，進(jìn)而結(jié)合補(bǔ)體，而發(fā)生溶血斑點，對著光源用肉眼即可判定。

（1）材料：①綿羊紅血球，處理同試管法，最后配成25％紅血球懸液；②新鮮豚鼠血清（同試管法處理）；③瓊脂糖，配成0.6％PBS液，水浴中溶化；④0.01Mol/L pH7.2PBS液；⑤兔抗羊紅血球抗體。

（2）操作方法：①將溶化的0.6％瓊脂糖倒入一試管中，置45℃～48℃水浴中；②加0.1ml 25％紅血球懸液，0.1ml豚鼠補(bǔ)體，迅速混勻，傾注一干凈載玻片上；③ 凝固后，在凝膠表面固定區(qū)域滴加2ml待測樣品，標(biāo)準(zhǔn)陽性血清和對照試液；④待溶液全部滲入凝膠后，置濕盤；⑤37℃溫育1h～2h，觀察并判定結(jié)果。

強(qiáng)陽性（ ） 中等陽性（ ）

弱陽性（ ） 陰性（﹣）

必要時可置室溫過夜，再判定一次。

3．膜熒光檢測法

（1）材料：①培養(yǎng)液HEM或RPMI－1640；②熒光試劑：異硫氰酸熒光素（FITC）標(biāo)記的抗小鼠免疫球蛋白；③50％甘油緩沖液：1份甘油加1份體積0.05Mol/L pH 7.2 PBS 液混合即成；④熒光顯微鏡、載玻片、蓋玻片、吸管等。

（2）操作方法：①用培養(yǎng)液洗滌二次細(xì)胞，懸浮成2.0×107／ml；②50µl細(xì)胞懸液加50μl培養(yǎng)上清液混合，置4℃30min，用培養(yǎng)液洗滌3次，1 000r/min離心；③以50µlFITC—抗小鼠免疫球蛋白重新懸浮壓積細(xì)胞，水浴30min～60min；④用冷培養(yǎng)液洗3次細(xì)胞，重新懸��；⑤取一滴細(xì)胞懸液滴在玻片上，復(fù)蓋片，用甘油緩沖液封固，置熒光顯微鏡下觀察。著色細(xì)胞也可以在固定后觀察，一滴細(xì)胞懸液，涂片、風(fēng)干，用95％酒精固定10min，固定后的載玻片用PBS洗滌，蓋上蓋玻片，進(jìn)行觀察。

4．免疫球蛋白和亞類球蛋白的檢測 以瓊脂雙擴(kuò)散試驗法進(jìn)行，此法簡單易操作，特異性好。注意必須將培養(yǎng)液濃縮10～50倍，否則做雙向瓊擴(kuò)不出現(xiàn)沉淀線。其檢測方法為：

（1）制備各種兔抗小鼠IgG1~4、 IgM1~2、IgA1~2和K、λ抗血清,也可直接購買。

（2）取5ml培養(yǎng)物的上清液緩慢加入0.5ml的飽和硫酸銨溶液，混勻，靜置3h，離心沉淀，去上清，沉淀加0.05ml蒸餾水溶解。

（3）制成1％瓊脂糖凝膠板，打孔。中間孔加20μl濃縮上清液，周圍孔加20µl特異性抗血清，以10μl正常小鼠血清作對照。

也可以采用酶聯(lián)免疫吸附試驗、間接血凝試驗以及放射免疫等方法檢測。