最近，人們把注意力集中到了活細(xì)胞的共振能量轉(zhuǎn)移（RET，resonance energy transfer）技術(shù)上。利用這種方法可以非侵入性地監(jiān)測特異蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)之間的相互作用。這些技術(shù)是建立在能量轉(zhuǎn)移的基礎(chǔ)上，在一個發(fā)光或熒光供體和一個熒光受體（如綠色熒光蛋白的突變體GFP）之間會發(fā)生能量轉(zhuǎn)移。例如，在一些海洋生物（如水母Aequorea victoria和海參R. reniformis）中自然發(fā)生一種能量轉(zhuǎn)移現(xiàn)象――生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移。在這個過程中，Renilla的熒光素酶（Rluc）在有底物腔腸素的存在下能夠發(fā)出藍(lán)光（480nm），能夠轉(zhuǎn)移能量到GFP的突變體上[增強(qiáng)的黃色熒光蛋白(EYFP)], 隨之后者發(fā)出530nm的綠光。這兩個蛋白的相互作用可以通過Rluc融合蛋白和EYFP融合蛋白兩者的相互關(guān)系來進(jìn)行評估。它們間的能量轉(zhuǎn)移只有在Rluc和EYFP的兩個融合蛋白接近到足夠近（<100 A°）的距離時才能發(fā)生。BRET的信號可以通過比較EYFP發(fā)出的綠光和Rluc發(fā)出的藍(lán)光的量來進(jìn)行測量。因?yàn)?/span>BRET信號是一個比率數(shù)，不是一個絕對量，它消除了那些因?yàn)橛捎诩?xì)胞數(shù)、細(xì)胞類型和其它實(shí)驗(yàn)變量而引起的數(shù)據(jù)變量。
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圖2. 生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移(BRET)監(jiān)測蛋白－蛋白互作。 |
這個方法已成功地應(yīng)用于活細(xì)胞中受體二聚體形成（如胰島素受體）和受體間相互作用等研究中。BRET也是一種靈敏地檢測方法，可以應(yīng)用于活細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄激活核蛋白相互作用等研究中。
雖然BRET和FRET特別適合于高通量篩選，被使用于藥物開發(fā)中，但是此技術(shù)目前因?yàn)殛P(guān)系到供體和受體間的距離障礙，所以還是有一些缺點(diǎn)。
向微型化分析的方向發(fā)展
小型化分析設(shè)備，如微矩陣和微流裝置，已經(jīng)得到充分的發(fā)展，同時不同的，基于傳統(tǒng)的小規(guī)模分析的方法也得到進(jìn)一步發(fā)展，如微孔板。
