亚洲欧美日韩国产综合网_自拍视频精品一区二区三区_无码激情AV一区二区三区_二天天AV综合网

VIP標(biāo)識 上網(wǎng)做生意,首選VIP會員| 設(shè)為首頁| 加入桌面| | 手機(jī)版| RSS訂閱
食品伙伴網(wǎng)服務(wù)號
 

siRNA表達(dá)框架

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-01

siRNA表達(dá)框架(siRNA expression cassettes,SECs)是一種由PCR得到的siRNA表達(dá)模版,能夠直接導(dǎo)入細(xì)胞進(jìn)行表達(dá)而無需事前克隆到載體中。這個方法最早是由Castanotto和其同事采用,包括一個RNA polⅢ啟動子,一段發(fā)夾結(jié)構(gòu)siRNA,一個RNA pol III終止位點(diǎn)。與siRNA表達(dá)載體不同的是,SECs不需要載體克隆和測序等頗為費(fèi)時的步驟,可以直接由PCR得到,耗時不到一天。因此,SECs成為篩選siRNA的最有效工具之一,甚至可以用來篩選在特定的研究體系中啟動子和siRNA的最適搭配。如果在PCR兩端添加酶切位點(diǎn),那么通過SECs篩選出的最有效的siRNA后,可以直接克隆到載體中構(gòu)建siRNA表達(dá)載體。構(gòu)建好的載體可以用于穩(wěn)定表達(dá)siRNA和長效抑制的研究。

該方法的主要缺點(diǎn)是PCR產(chǎn)物很難轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中。如果有適合的新型轉(zhuǎn)染試劑能提高SEC的轉(zhuǎn)染效率該問題就可以解決了。另外,沒有克隆到載體中的PCR片斷并不適于大規(guī)模制備。

最適用于:篩選siRNA序列,在克隆到載體前篩選最佳啟動子
不適用于:長期抑制研究。(如果克隆到載體后就可以了)

 

 

 

 

 
推薦圖文
推薦食品專題
點(diǎn)擊排行
 
 
Processed in 0.153 second(s), 19 queries, Memory 0.88 M