醋酸纖維素是提纖維素的羥基乙;纬傻睦w維素醋酸酯。由該物質(zhì)制成的薄膜稱為醋酸纖維素薄膜。這種薄膜對(duì)蛋白質(zhì)樣品吸附性小,幾乎能完全消除紙電泳中出現(xiàn)的“拖尾”現(xiàn)象,又因?yàn)槟さ挠H水性比較小,它所容納的緩沖液也少,電泳時(shí)電流的大部分由樣品傳導(dǎo),所以分離速度快,電泳時(shí)間短,樣品用量少,5μg的蛋白質(zhì)可得到滿意的分離效果。因此特別適合于病理情況下微量異常蛋白的檢測(cè)。
醋酸纖維素膜經(jīng)過冰醋酸乙醇溶液或其它透明液處理后可使膜透明化有利于對(duì)電泳圖譜的光吸收掃描測(cè)定和膜的長(zhǎng)期保存。
、辈牧吓c試劑 醋酸纖維素膜一般使用市售商品,常用的電泳緩沖液為pH8.6的巴比妥緩沖液,濃度在0.05-0.09mol/L。
、膊僮饕c(diǎn)
⑴膜的預(yù)處理:必須于電泳前將膜片浸泡于緩沖液,浸透后,取出膜片并用濾紙吸去多余的緩沖液,不可吸得過干。
、萍訕樱簶悠酚昧恳罉悠窛舛、本身性質(zhì)、染色方法及檢測(cè)方法等因素決定。對(duì)血清蛋白質(zhì)的常規(guī)電泳分析,每cm加樣線不超過1μl,相當(dāng)于60-80μg的蛋白質(zhì)。
⑶電泳:可在室溫下進(jìn)行。電壓為25V/cm,電流為0.4-0.6mA/cm寬。
、热旧阂话愕鞍踪|(zhì)染色常使用氨基黑和麗春紅,糖蛋白用甲苯胺藍(lán)或過碘酸-Schiff試劑,脂蛋白則用蘇丹黑或品紅亞硫酸染色。
⑸脫色與透明:對(duì)水溶性染料最普遍應(yīng)用的脫色劑是5%醋酸水溶液。為了長(zhǎng)期保存或進(jìn)行光吸收掃描測(cè)定,可浸入冰醋酸:無水乙醇=30:70(V/V)的透明液中。