1、常規(guī)脫蠟浸入0.01mol/LPBS;
2、用0.2mol/L鹽酸處理5min;
3、蛋白酶K(25μg/m1)消化37℃ 15min;
4、分別用80%,95%和100%酒精脫水,室溫干片;
5、加PCR混合液25μL(10mmol/L Tris-HCl,50mmol/L KCl,1.5mmol/L MgCl2,各加200μmol/L dATP,dCTP,dGTP,1.5mmol/L dig-11-dUTP l.5μl,引物250ng,Taq DNA聚合酶2U),加蓋片;
6、94℃變性5min后置入65℃濕盒中5min;
7、用0.1×SSC液,65℃洗5min;
8、片于65℃ 10s~20s;用4×SSC-0.1%吐溫20液42℃洗5min,2次;
9、經(jīng)Buffer I液洗后滴加20%羊血清封閉30min;
10、加地高辛抗體復(fù)合物(1:500)室溫下2h;
11、BufferⅢ液洗5min;
12、用BCIP-NBT顯色1h~2h,在鏡下控制,終止顯色;
13、用中性紅或核固紅襯染,酒精脫水,二甲苯透明,樹(shù)脂封片。
2、用0.2mol/L鹽酸處理5min;
3、蛋白酶K(25μg/m1)消化37℃ 15min;
4、分別用80%,95%和100%酒精脫水,室溫干片;
5、加PCR混合液25μL(10mmol/L Tris-HCl,50mmol/L KCl,1.5mmol/L MgCl2,各加200μmol/L dATP,dCTP,dGTP,1.5mmol/L dig-11-dUTP l.5μl,引物250ng,Taq DNA聚合酶2U),加蓋片;
6、94℃變性5min后置入65℃濕盒中5min;
7、用0.1×SSC液,65℃洗5min;
8、片于65℃ 10s~20s;用4×SSC-0.1%吐溫20液42℃洗5min,2次;
9、經(jīng)Buffer I液洗后滴加20%羊血清封閉30min;
10、加地高辛抗體復(fù)合物(1:500)室溫下2h;
11、BufferⅢ液洗5min;
12、用BCIP-NBT顯色1h~2h,在鏡下控制,終止顯色;
13、用中性紅或核固紅襯染,酒精脫水,二甲苯透明,樹(shù)脂封片。