陰離子交換劑與陽(yáng)離子交換劑的裝柱和層析過(guò)程基本相同。交聯(lián)葡聚糖的預(yù)處理只需充分溶脹和平衡，不需要除去細(xì)粒碎片和酸堿處理。其他步驟也基本同離子交換纖維素。

1．劑型的選擇 根據(jù)蛋白質(zhì)在所用緩沖液pH值下帶電荷的種類選擇，如pH高于蛋白質(zhì)等電點(diǎn)，應(yīng)選陰離子交換劑，反之應(yīng)選陽(yáng)離子交換劑。一般情況下，DEAE-纖維素用于分離酸性蛋白，而CM纖維素用于分離堿性蛋白質(zhì)。

下面以DEAE-纖維素操作為例，介紹試驗(yàn)方法

2．膨脹活化 此步的目的在于除去雜質(zhì)，暴露DEAE-纖維素上的極性基團(tuán)。DEAE-纖維素的用量則根據(jù)柱容積的大小和所需過(guò)柱樣品的量來(lái)決定。一般是1.0g DEAE-纖維素相當(dāng)于6ml～8ml柱床體積。

稱取所需的量，撒于0.5Mol/L NaOH溶液中（1g DEAE—纖維素干粉約需15倍NaOH液），浸泡1h左右，不時(shí)攪拌。抽濾（以布氏漏斗加兩層濾紙或尼龍紗布抽濾），以蒸餾水洗滌，再抽濾，直至濾液近中性為止，再將纖維素浸泡于0.5Mol/L HCl中1h，同樣抽濾液至近中性。再將纖維素浸于0.5Mol/L NaOH液中，同樣處理，洗至中性。

3．平衡 將DEAE—纖維素放入0.0lMol/L pH 7. 4 PB液中（即起始緩沖液），靜止1h，不時(shí)攪拌，待纖維素下沉后，傾去上清液或抽濾除去洗液，如此反復(fù)幾次至傾出液體的pH值與加入的PB液的pH值相近時(shí)為止。

4．裝柱 層析柱的選擇要大小、長(zhǎng)度適當(dāng)。一般而言，柱長(zhǎng)和柱直徑之比為10︰1～20︰1，柱的內(nèi)徑上下要均勻一致。用前將層析柱在清潔液內(nèi)浸泡處理24h，然后依次用常水、蒸餾水、起始緩沖液充分洗滌。

裝柱時(shí)，先剪一塊圓形的尼龍紗布（直徑與層析柱內(nèi)徑一致），放入層析柱底部。將柱下端連接細(xì)塑料管，夾上螺旋夾。把層析柱垂直固定在三角鐵架上，倒入起始緩沖液至一半的柱高，除去死區(qū)及塑料管內(nèi)的氣泡。再將平衡的DEAE－纖維素糊狀物沿管壁倒入柱中。注意不要產(chǎn)生氣泡，如有氣泡應(yīng)排除或重裝。擰開螺旋夾，使流速至1ml/5min，待緩沖液快接近纖維素面時(shí)，繼續(xù)倒入纖維素糊，同時(shí)用玻璃棒攪拌表面層，以免使兩次加入的纖維素形成分界層，通過(guò)進(jìn)出緩沖液調(diào)節(jié)流量，也可通過(guò)塑料管的升降來(lái)控制，至柱床體積不變?yōu)橹�。剪一圓形濾紙（與柱內(nèi)徑大小一致），從柱的上端輕輕放入，使其沉接于纖維素床表面，以免在加樣時(shí)打亂纖維素層。裝好柱的柱面應(yīng)該是平整的，無(wú)傾斜，整個(gè)柱床內(nèi)無(wú)氣泡、不分層。繼續(xù)平衡，使流出液的pH值與流入液的pH值完全一致為止。

5．上樣 要層析的樣品首先必須用起始緩沖液（4℃）平衡過(guò)夜，中間可換液數(shù)次。將柱的上端打開，用吸管將纖維素柱上面的緩沖液吸出，不要吸凈，留一薄層液面，以免空氣進(jìn)入。沿管壁緩緩加入樣品，注意不要打亂纖維素表層。擰開下端的螺旋夾，使樣品進(jìn)入交換劑中，快要進(jìn)完時(shí)，加1ml～2ml緩沖液沖洗柱壁，隨即用多量的洗脫液洗脫。

樣品的加量與DEAE—纖維素有一個(gè)最適比的關(guān)系，超過(guò)這個(gè)比值，吸附就不完全，直接影響到分離的純度。經(jīng)過(guò)粗提的 —球蛋白50mg～100mg，用干重約4g DEAE－纖維素裝柱分離，可獲得理想結(jié)果。

6．洗脫 對(duì)于陰離子交換劑而言，洗脫的辦法是使pH逐漸降低，而離子濃度逐漸升高。一般的辦法，是穩(wěn)定一個(gè)因素而改變另一個(gè)因素洗脫。洗脫可采用分段洗脫和連續(xù)洗脫法，前者較實(shí)用，后者較準(zhǔn)確。

7．洗脫液的收集 利用自動(dòng)分步收集器收集，并以20%磺基水楊酸測(cè)試，當(dāng)?shù)鞍滓合聛?lái)時(shí)，開始分管收集，至無(wú)蛋白液為止。

8．交換柱的再生 將使用過(guò)的DEAE－纖維素移入燒杯中，用2Mol/L NaCl液浸泡，抽濾并洗滌數(shù)次。如不立即使用，可加1/10 000的疊氮鈉防腐，保存于4℃冰箱中。使用時(shí)，再以堿－酸－堿處理。