1．在10~20 ml 預(yù)雜交液中68℃溫育膜2h。

2．若使用雙鏈探針，在100℃下加熱32P標(biāo)記的雙鏈DNA 5 min，使之變性，然后迅速移至冰水中冷卻。

3．把變性的或單鏈放射性標(biāo)記的探針直接加到預(yù)雜交液中，在合適的溫度下繼續(xù)溫育12~16h。

4．雜交后，將膜從塑料袋中取出，在室溫下迅速轉(zhuǎn)移到含有100~200ml 1×SSC，0.1%SDS的塑料盒內(nèi)，將盒蓋好，置于水平振蕩器上，溫和振蕩10 min。

5．將膜轉(zhuǎn)移至另一含有100~200ml預(yù)熱至68℃、含0.1%SDS的0.5×SSC的塑料盒中。68℃下溫和振蕩10min。

6．重復(fù)步驟5，再洗滌至少2次，使68℃下共洗滌3次。

7．在印跡紙上晾干膜，然后讓膜于-70℃下在含增感屏的暗盒內(nèi)對X線片（Kodar XAR-5或相應(yīng)的膠片）放射自顯影24~48h。此外，也可通過磷圖像系統(tǒng)掃描得到膜上的圖像。