一、概要
恩諾沙星（ENR）作為一種氟喹諾酮類物質(zhì)，能抑制細菌DNA螺旋酶活性，常用于治療家畜禽感染性疾病。隨著ENR的大量使用，殘留于畜禽可食組織中的ENR及其代謝產(chǎn)物環(huán)丙沙星（CIP）引發(fā)了嚴重公共衛(wèi)生問題。
恩諾沙星ELISA檢測試劑盒是應(yīng)用ELISA技術(shù)研發(fā)而成的檢測產(chǎn)品，能最大限度地減少操作誤差和工作強度。

二、試驗原理
恩諾沙星ELISA檢測試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在酶標(biāo)板微孔條上預(yù)包被恩諾沙星抗原，樣本中殘留的恩諾沙星和微孔條上預(yù)包被的抗原競爭抗恩諾沙星抗體，加入酶標(biāo)二抗后，經(jīng)TMB底物顯色，樣本的吸光值與其殘留物恩諾沙星的含量成負相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較再乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即可得出樣品中殘留物恩諾沙星的含量。

三、適用范圍
恩諾沙星ELISA檢測試劑盒可定性、定量檢測肌肉、肝臟、蜂蜜等樣本中恩諾沙星的殘留量。

四、交叉反應(yīng)率
恩諾沙星  ………………………………………………100 %

五、檢測步驟
測定前應(yīng)須知：
1、使用之前將所有試劑和需用板條的溫度回升至室溫（20～25℃）。
2、使用之后立即將所有試劑放回2～8℃。
3、在ELISA分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的一致性，正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。
4、在所有恒溫孵育過程中，避免光線照射，用蓋板膜封住微孔板。
操作步驟：
1、將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，置于室溫（20～25℃）回溫30min以上，注意每種液體試劑使用前均須輕輕搖勻。
2、取出所需數(shù)量的微孔板，將不用的微孔放入帶有干燥劑的錫箔袋中，保存于2～8℃。
3、洗滌工作液在使用前也需回溫。
4、編號：將樣品和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號，每個樣品和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣品孔所在的位置。
5、加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品：加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品50ml/孔到對應(yīng)的微孔中，然后加入抗試劑50ml/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應(yīng)30min。
6、洗板：小心揭開蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，用洗滌工作液250ml/孔，充分洗滌4~5次，每次間隔10~20s，用吸水紙拍干（拍干后若有氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。
7、加酶標(biāo)物：加入酶標(biāo)物100ml/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應(yīng)30min，取出重復(fù)洗板步驟6。
8、顯色：加入底物液A液50ml/孔，再加底物液B液50ml/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應(yīng)15～20min。（如顏色較淺可適當(dāng)延長此步的反應(yīng)時間）
9、測定：加入終止液50ml/孔，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測，請在5min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)），測定每孔OD值。(若無酶標(biāo)儀，則不加終止液用目測法可進行判定)。

六、檢測方法靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度
試劑盒靈敏度：0.5ppb
樣品最低檢測限：
肌肉樣品………………………………………1ppb
肝臟樣品………………………………………2ppb
蜂蜜樣品……………………………………………2ppb
回收率：
肌肉樣品………………………………………80±10%
肝臟樣品………………………………………75±15%
蜂蜜樣品………………………………………85±10%
精密度：試劑盒的變異系數(shù)均小于10%

七、注意事項
1、室溫低于20℃或試劑及樣品沒有回到室溫（20～25℃）會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
2、在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進行下一步操作。
3、每加一種試劑前需將其搖勻。
4、反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
5、不要使用過了有效日期的試劑盒；也不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑，摻雜使用過了有效期的試劑盒會引起靈敏度的降低；不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
6、儲存條件
保存試劑盒于2～8℃，不要冷凍，將不用的酶標(biāo)板微孔板放進錫箔袋重新密封。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
7、試劑變質(zhì)的跡象
發(fā)色試劑有任何顏色表明發(fā)色劑變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時，表示試劑可能變質(zhì)。
8、在加入底物液A液和底物液B液后，一般顯色時間為15～20min即可。若顏色較淺，可延長反應(yīng)時間到30min，但不得超過30min。反之，則減短反應(yīng)時間。
9、恩諾沙星ELISA快速檢測試劑盒最佳反應(yīng)溫度為25℃，溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

八、貯藏條件及保存期
貯藏條件：保存試劑盒于2~8℃。
保存期：  該產(chǎn)品有效期為12個月。