一、概要
 孔雀石綠是一種帶有金屬光澤的綠色結晶體，又名堿性綠、嚴基塊綠、孔雀綠，其既是殺真菌劑，又是染料，易溶于水，溶液呈藍綠色。長期以來，漁民都用它來預防魚的水霉病、鰓霉病、小瓜蟲病等，而且為了使鱗受損的魚延長生命，在運輸過程中和存放池內(nèi)，也常使用孔雀石綠。
 孔雀石綠檢測試劑盒是應用ELISA技術研發(fā)而成的檢測產(chǎn)品，能最大限度地減少操作誤差和工作強度。

二、試驗原理
 孔雀石綠檢測試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在酶標板微孔條上預包被孔雀石綠抗原，樣品殘留的孔雀石綠和微孔條上預包被的抗原共同競爭抗孔雀石綠抗體，加入酶標二抗后，經(jīng)TMB底物顯色，樣品吸光度值與其殘留物孔雀石綠呈負相關，與標準曲線比較再乘以其對應的稀釋倍數(shù)，即可得出樣品中孔雀石綠的含量。

三、適用范圍
 孔雀石綠檢測試劑盒可定性、定量檢測魚池或者魚缸水樣中的孔雀石綠殘留。

四、交叉反應率
顯性孔雀石綠 ……………………………………………100%
結晶紫 ……………………………………………………180%

五、檢測步驟
測定前應須知：
 1、使用之前將所有試劑和需用板條的溫度回升至室溫（20～25℃）。
 2、使用之后立即將所有試劑放回2～8℃。
 3、在ELISA分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的一致性，正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。
 4、在所有恒溫孵育過程中，避免光線照射，用蓋板膜封住微孔板。
 操作步驟：
 1、將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，置于室溫（20～25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
 2、取出需要數(shù)量的微孔板，將不用的微孔放入自封袋，保存于2～8℃。
 3、洗滌工作液在使用前也需回溫。
 4、編號：將樣品和標準品對應微孔按序編號，每個樣品和標準品做2孔平行，并記錄標準孔和樣品孔所在的位置。
 5  加標準品/樣品：加標準品/樣品50μl/孔到對應的微孔中，然后加入抗試劑50μl/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應30min。
 6、洗板：小心揭開蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，用洗滌工作液250μl/孔，充分洗滌4～5次，每次間隔10s，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。
 7、加酶標物：加入酶標物100μl/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應30min，取出重復洗板步驟6。
 8、顯色：加入底物液A液50μl/孔，再加底物液B液50μl/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應15～20min。
 9、測定：加入終止液50μl/孔，輕輕振蕩混勻，設定酶標儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測，請在5min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)），測定每孔OD值。（若無酶標儀，則不加終止液用目測法可進行判定）。

六、孔雀石綠檢測試劑盒靈敏度、準確度、精密度
試劑盒靈敏度：0.1ppb
樣品最低檢測限：
水樣………………………………………………………0.2ppb
回收率：
水樣……………………………………………………100±10%
精密度：試劑盒的變異系數(shù)均小于10%

七、注意事項
 1、整個樣品處理過程要迅速，不應放置過長，以防影響檢測結果。
 2、室溫低于20℃或試劑及樣品沒有回到室溫（20～25℃）會導致所有標準的OD值偏低。
 3、在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會出現(xiàn)標準曲線不成線性，重復性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應立即進行下一步操作。
 4、每加一種試劑前需將其搖勻。
 5、反應終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
 6、不要使用過了有效日期的試劑盒；不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑，摻雜使用過了有效期的試劑盒會引起靈敏度的降低；不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
 7、儲存條保存試劑盒于2～8℃，不要冷凍，將不用的酶標板微孔板放進自封袋重新密封。標準物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
 8、試劑變質(zhì)的跡象發(fā)色試劑有任何顏色表明發(fā)色劑變質(zhì)，應當棄之。0標準的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時，表示試劑可能變質(zhì)。
 9、濃縮洗滌液內(nèi)部如有結晶屬正常現(xiàn)象，請加熱溶解后使用。
 10、在加入底物液A液和底物液B液后，一般顯色時間為15～20min即可。若顏色較淺，可延長反應時間到30min。反之，則減短反應時間。
 11、該試劑盒最佳反應溫度為25℃，溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

八、貯藏條件及保存期
貯藏條件：保存試劑盒于2～8℃。
保存期：該產(chǎn)品有效期為12個月。