氯霉素檢測(cè)試劑盒可定性、定量檢測(cè)動(dòng)物組織（含水產(chǎn)）、牛奶、蜂蜜、飼料、雞蛋等樣品中氯霉素的殘留

一、概要
 氯霉素 （Chloramphenicol,CAP）曾是應(yīng)用廣泛的抗菌素，但由于其存在嚴(yán)重的副作用，能引起人的再生障礙性貧血，粒細(xì)胞缺乏癥等疾病，歐美等發(fā)達(dá)國(guó)家已相繼禁止或嚴(yán)格禁止使用。
 氯霉素檢測(cè)試劑盒是應(yīng)用ELISA技術(shù)研發(fā)的新一代藥物殘留檢測(cè)產(chǎn)品，操作時(shí)間僅需45min，能最大限度地減少操作誤差和工作強(qiáng)度。

二、試驗(yàn)原理
 氯霉素檢測(cè)試劑盒采用直接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法，在酶標(biāo)板微孔條上預(yù)包被氯霉素抗體，樣品中殘留的氯霉素和酶標(biāo)氯霉素抗原競(jìng)爭(zhēng)微孔條上預(yù)包被的抗體，經(jīng)TMB底物顯色，樣品吸光值與其殘留物氯霉素的含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)比較再乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即可得出樣品中氯霉素的含量。

三、交叉反應(yīng)率
氯霉素………………………………………………………100％
氯霉素堿……………………………………………………0.5％
甲基氯霉素……………………………………………≤0.05％
氟苯尼考…………………………………………………<0.01%
氟苯尼考胺………………………………………………<0.1%
*注：標(biāo)準(zhǔn)品濃度為0ppb,0.05ppb,0.15ppb,0.45ppb,1.35ppb,4.05ppb

四、操作步驟：
1、將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，置于室溫（20～25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、取出需要數(shù)量的微孔板，將不用的微孔放入自封袋，保存于2～8℃。
3、洗滌工作液在使用前也需回溫。
4、編號(hào)：將樣品/標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣品孔所在的位置。
5、加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品：加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品70l到對(duì)應(yīng)的微孔中，再加入氯霉素酶標(biāo)物30l/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應(yīng)30min。
6、洗板：小心揭開(kāi)蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，用洗滌工作液300l/孔，充分洗滌5次，每次間隔30s，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過(guò)的槍頭戳破）。
7、顯色：加入底物液A液50l/孔，再加底物液B液50l/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應(yīng)15～20min。
8、測(cè)定：加入終止液50l/孔，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處（建議用雙波長(zhǎng)450/630nm檢測(cè)，請(qǐng)?jiān)?min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)），測(cè)定每孔OD值。(若無(wú)酶標(biāo)儀，則不加終止液用目測(cè)法可進(jìn)行判定)。

五、檢測(cè)方法靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度
試劑盒靈敏度：0.05ppb
樣品最低檢測(cè)限：
組織樣品……………………………………………0.1ppb
牛奶………………………………………………0.05ppb
飼料……………………………………………0.2ppb
蛋…………………………………………………………0.05ppb
蜂蜜…………………………………………………0.05ppb
回收率：
組織樣品……………………………………………… 102±15%
牛奶………………………………………………… 110±10%
飼料………………………………………………………93±10%
蛋………………………………………………………95±15%
蜂蜜………………………………………………………80±10%
精密度：試劑盒的變異系數(shù)均小于10%

六、注意事項(xiàng)
1、室溫低于20℃或試劑及樣品沒(méi)有回到室溫（20～25℃）會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
2、在洗板過(guò)程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會(huì)出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)不成線(xiàn)性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
3、每加一種試劑前需將其搖勻。
4、反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
5、不要使用過(guò)了有效日期的試劑盒；也不要使用過(guò)了有效期的試劑盒中的任何試劑，摻雜使用過(guò)了有效期的試劑盒會(huì)引起靈敏度的降低；不要交換使用不同批號(hào)試劑盒中的試劑。
6、儲(chǔ)存條件:保存試劑盒于2～8℃，不要冷凍，將不用的酶標(biāo)板微孔板放進(jìn)自封袋重新密封。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無(wú)色的發(fā)色劑對(duì)光敏感，因此要避免直接暴露在光線(xiàn)下。
7、試劑變質(zhì)的跡象
發(fā)色試劑有任何顏色表明發(fā)色劑變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)。
8、在加入底物液A液和底物液B液后，一般顯色時(shí)間為15～20min即可。若顏色較淺，可延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間到30min（或更長(zhǎng)），但不得超過(guò)40min。反之，則減短反應(yīng)時(shí)間。
9、該試劑盒最佳反應(yīng)溫度為25℃，溫度過(guò)高或過(guò)低將導(dǎo)致檢測(cè)吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

七、貯藏條件及保存期
貯藏條件：保存試劑盒于2～8℃。
保存期：該產(chǎn)品有效期為12個(gè)月。