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實驗室常用貯存液的配制參數(shù)

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2005-11-18
  1.30%丙烯酰胺溶液
  【配制方法】將29g丙烯酰胺和1g N,N’-亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為60ml的水中。加熱至37℃溶解之,補加水至終體積為100ml。用Nalgene濾器(0.45μm孔徑)過濾除菌,查證該溶液的pH值應不大于7.0,置棕色瓶中保存于室溫。
  【注意】丙烯酰胺具有很強的神經(jīng)毒性并可以通過皮膚吸收,其作用具累積性。稱量丙烯酰胺和亞甲雙丙烯酰胺時應戴手套和面具?烧J為聚丙烯酰胺無毒,但也應謹慎操作,因為它還可能會含有少量未聚合材料。一些價格較低的丙烯酰胺和雙丙烯酰胺通常含有一些金屬離子,在丙烯酰胺貯存液中加入大約0.2體積的單床混合樹脂(MB-1Mallinckrodt),攪拌過夜,然后用Whatman 1號濾紙過濾以純化之。在貯存期間,丙烯酰胺和雙丙烯酰胺會緩慢轉化成丙烯酰和雙丙烯酸。
  2.40%丙烯酰胺
  【配制方法】把380g丙烯酰胺(DNA測序級)和20g N,N’-亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為600ml的蒸餾水中。繼續(xù)按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法處理,但加熱溶解后應以蒸餾水補足至終體積為1L。
  【注意】見上述配制30%丙烯酰胺的說明,40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列測定。
  3.放線菌素D溶液
  【配制方法】把20mg放線菌素D溶解于4ml 100%乙醇中,1:10稀釋貯存液,用100%乙醇作空白對照讀取OD440值。放線菌素D(分子量為1255)純品在水溶液中的摩爾消化系數(shù)為21,900,故而1mg/ml的放線菌素D溶液在440nm處的吸光值為0.182,放線菌素D的貯存液應放在包有箔片的試管中,保存于-20℃。
  【注意】放線菌素D是致畸劑和致癌劑,配制該溶液時必須戴手套并在通風櫥內(nèi)操作,而不能在開放在實驗桌面上進行,謹防吸入藥粉或讓其接觸到眼睛或皮膚。
  藥廠提供的作治療用途的放線菌素D制品常含有糖或鹽等添加劑。只要通過測量貯存液在440nm波長處的光吸收確定放線菌素D的濃度,這類制品便可用于抑制自身引導作用。
4.0.1mol/L腺苷三磷酸(ATP)溶液
  【配制方法】在0.8ml水中溶解60mg ATP,用0.1mol/L NaOH調(diào)至pH值至7.0,用蒸餾水定容1ml,分裝成小份保存于-70℃
  5.10mol/L乙酸酰溶液
  【配制方法】把770g乙酸酰溶解于800ml水中,加水定容至1L后過濾除菌。
  6.10%過硫酸銨溶液
  【配制方法】把1g過硫酸銨溶解于終量為10ml的水溶液中,該溶液可在4℃保存數(shù)周。
  7.BCIP溶液
  【配制方法】把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二鈉鹽(BCIP)溶解于10ml 100%的二甲基甲酰胺中,保存于4℃
  8.2×BES緩沖鹽溶液
  【配制方法】用總體積90ml的蒸餾水溶解1.07g鹽溶液BES[N,N-雙(2-羥乙基)-2-氨基乙磺酸]、1.6g NaCl和0.027g Na2HPO4,室溫下用HCl調(diào)節(jié) 該溶液的pH值至6.96、然后加入蒸餾水定容至100ml,用0.22μm濾器過濾除菌,分裝成小份,保存于-20℃。
  9.1mol/L CaCl2溶液
  【配制方法】在200ml蒸餾水中溶解54g CaCl2?6H2O,用0.22μm濾器過濾除菌,分裝成10ml小份貯存于-20℃。
  【注意】制備感受態(tài)細胞時,取出一小份解凍并用蒸餾水稀釋至100ml,用Nalgene濾器(0.45μm孔徑)過濾除菌,然后驟冷至0℃。
  10.2.5mol/L CaCl2溶液
  【配制方法】在20ml蒸餾水中溶解13.5g CaCl2?6H2O,用0.22μm濾器過濾除菌,分裝成1ml小份貯存于-20℃。
  11.1mol/L二硫蘇糖醇(DTT)溶液
  【配制方法】用20ml 0.01mol/L乙酸鈉溶液(pH5.2)溶解3.09g DTT,過濾除菌后分裝成1ml小份貯存于-20℃。
  【注意】DTT或含有DTT的溶液不能進行高壓處理。
  12.脫氧核苷三磷酸(dNTP)溶液
  【配制方法】把每一種dNTP溶解于水至濃度各為100mmol/L左右,用微量移液器吸取0.05mol/l Tris堿分別調(diào)節(jié) 每一dNTP溶液的pH值7.0(用pH試紙檢測),把中和后的每種dNTP溶液各取一份作適當稀釋,在給出的波長下讀取光密度計算出每種dNTP的實際濃度,然后用水稀釋成終濃度為50mmol/L的dNTP,分裝成小份貯存于-70℃。
  13.0.5mol/l EDTA(pH8.0)溶液
  【配制方法】在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-Na?2H2O),在磁力攪拌器上劇烈攪拌,用NaOH調(diào)節(jié) 溶液的pH值至8.0(約需20g NaOH顆粒)然后定容至1L,分裝后高壓滅菌備用。
  【注意】EDTA二鈉鹽需加入NaOH將溶液的pH值調(diào)至接近8.0,才能完全溶解。
  14.溴化乙錠(10mg/ml溶液)
  【配制方法】在100ml水中加入1g溴化乙錠,磁力攪拌數(shù)小時以確保其完全溶解,然后用鋁箔包裹容器或轉移至棕色瓶中,保存于室溫。
  【注意】小心:溴化乙錠是強誘變劑并有中度毒性,使用含有這種染料的溶液時務必戴上手套,稱量染料時要戴面罩。
  15.2×HEPES緩沖鹽溶液
  【配制方法】用總量為90ml的蒸餾水溶解1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2PO4?2H2O、0.2g葡聚糖和1gHEPES,用0.5mol/l NaOH調(diào)節(jié) pH值至7.05,再用蒸餾水定容至100ml。用0.22μm濾器過濾除菌,分裝成5ml小份,貯存于-20℃。
  16.IPTG溶液
  【配制方法】IPTG為異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(分子量為238.3),在8ml蒸餾水中溶解2g IPTG后,用蒸餾水定容至10ml,用0.22μm濾器過濾除菌,分裝成1ml小份貯存于-20℃。
  17.1mol/L乙酸鎂溶液
  【配制方法】在800ml水中溶解214.46g四水乙酸鎂,用水定容至1L過濾除菌。
  18.1mol/L MgCl2溶液
  【配制方法】在800ml水中溶解203.4g MgCl2?6H2O,用水定容至1L,分裝成小份并高壓滅菌備用。
  【注意】MgCl2極易潮解,應選購小瓶(如100g)試劑,啟用新瓶后勿長期存放。
  19.β-巰基乙醇(BME)溶液
  【配制方法】一般得到的是14.4mol/L溶液,應裝在棕色瓶中保存于4℃。
  【注意】BME或含有BME的溶液不能高壓處理。
20.NBT溶液
  【配制方法】把0.5g氯化氮藍四唑溶解于10ml 70%的二甲基甲酰胺中,保存于4℃。
  21.酚/氯仿溶液
  【配制方法】把酚和氯仿等體積混合后用0.1mol/L Tris?HCl(pH7.6)抽提幾次以平衡這一混合物,置棕色玻璃瓶中,上面覆蓋等體積的0.01mol/l Tris?HCl(pH7.6)液層,保存于4℃。
  【注意】酚腐蝕性很強,并可引起嚴重灼傷,操作時應戴手套及防護鏡,穿防護服。所有操作均應在化學通風櫥中進行。與酚接觸過的部位皮膚應用大量的水清洗,并用肥皂和水洗滌,忌用乙醇。
  22.10mmol/L苯甲基磺酰氟(PMSF)溶液
  【配制方法】用異丙醇溶解PMSF成1.74mg/ml(10mmol/L),分裝成小份貯存于-20℃。如有必要可配成濃度高達17.4mg/ml的貯存液(100mmol/L)。
  【注意】PMSF嚴重損害呼吸道粘膜、眼睛及皮膚,吸入、吞進或通過皮膚吸收后有致命危險。一旦眼睛或皮膚接觸了PMSF,應立即用大量水沖洗之。凡被PMSF污染的衣物應予丟棄。PMSF在水溶液中不穩(wěn)定。應在使用前從貯存液中現(xiàn)用現(xiàn)加于裂解緩沖液中。PMSF在水溶液中的活性喪失速率隨pH值的升高而加快,且25℃的失活速率高于4℃。pH值為8.0時,20μmmol/l PMSF水溶液的半壽期大約為85min,這表明將PMSF溶液調(diào)節(jié) 為堿性(pH>8.6)并在室溫放置數(shù)小時后,可安全地予以丟棄。
  23.磷酸鹽緩沖溶液(PBS)溶液
  【配制方法】在800ml蒸餾水中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,用HCl調(diào)節(jié) 溶液的pH值至7.4加水定容至1L,在15lbf/in2(1034×105Pa)高壓下蒸氣滅菌20min。保存于室溫。
  24.1mol/L乙酸鉀(pH7.5)溶液
  【配制方法】將9.82g乙酸鉀溶解于90ml純水中,用2mol/L乙酸調(diào)節(jié) pH值至7.5后加入純水定容到1L,保存于-20℃。
  25.乙酸鉀溶液(用于堿裂解)
  【配制方法】在60ml 5mol/L乙酸鉀溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml水,即成鉀濃度為3mol/L而乙酸根濃度為5mol/L的溶液。
  26.3mol/L乙酸鈉(pH5.2和pH7.0)溶液
  【配制方法】在80ml水中溶解408.1g三水乙酸鈉,用冰乙酸調(diào)節(jié) pH值至5.2或用稀乙酸調(diào)節(jié) pH值至7.0,加水定容到1L,分裝后高壓滅菌。
  27.5mol/L NaCl溶液
  【配制方法】在800ml水中溶解292.2g NaCl加水定容至1L,分裝后高壓滅菌。
  28.10%十二烷基硫酸鈉(SDS)溶液
  【配制方法】在900ml水中溶解100g電泳級SDS,加熱至68℃助溶,加入幾滴濃鹽酸調(diào)節(jié) 溶液的pH值至7.2,加水定容至1L,分裝備用。
  【注意】SDS的微細晶粒易擴散,因此稱量時要戴面罩,稱量完畢后要清除殘留在稱量工作區(qū)和天平上的SDS,10%SDS溶液無須滅菌。
  29.20×SSC溶液
  【配制方法】在800ml水中溶解175.3g NaCl和88.2g檸檬酸鈉,加入數(shù)滴10mol/l NaOH溶液調(diào)節(jié) pH值至7.0,加水定容至1L,分裝后高壓滅菌。
  30.20×SSPE溶液
  【配制方法】在800ml水中溶解17.5g NaCl、27.6g NaH2PO4?H2O和7.4g EDTA,用NaOH溶液調(diào)節(jié) pH值至7.4(約需6.5ml 10ml/L NaOH),加水定容至1L,分裝后高壓滅菌。
  31.100%三氯乙酸溶液
  【配制方法】在裝有500g TCA的瓶中加入227ml水,形成的溶液含有100%(M/V)TCA。
  32.1mol/L Tris溶液
  【配制方法】在800ml水中溶解121.91g Tris堿,加入濃HCl調(diào)節(jié) pH值至所需值。應使溶液冷至室溫后方可最后調(diào)定pH值,加水定容至1L,分裝后高壓滅菌。
  【注意】如1mol/L溶液呈現(xiàn)黃色,應予丟棄并置備質(zhì)量更好的Tris。
  盡管多種類型的電極均不能準確測量Tris溶液的pH值,但仍可向大多數(shù)廠商購得合適的電極。Tris溶液的pH值因溫度而異,溫度每升高1℃,pH值大約降低0.03個單位。例如:0.05mol/L的溶液在5℃、25℃、和37℃時的pH值分別為9.5、8.9和8.6。
  33.Tris緩沖鹽溶液(TBS)(25mmol/l Tris)
  【配制方法】在800ml蒸餾水中溶解8g NaCl、0.2g KCl和3g Tris堿,加入0.015g酚并用HCl調(diào)至pH值至7.4,用蒸餾水定容至1L,分裝后在151bf/in2(1.034×105Pa)高壓下蒸汽滅菌20min,于室溫保存。
  34.X-gal溶液
  【配制方法】X-gal為5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D半乳糖苷。用二基甲酰胺溶解X-gal配制成的20mg/ml的貯存液。保存于一玻璃管或聚丙烯管中,裝有X-gal溶液的試管須用鋁箔封裹以防因受光照而被破壞,并應貯存于-20℃。X-gal溶液無須過濾除菌。
 
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