一、 樣品消化
1、 稱取試樣(根據(jù)樣品含氮量)置于洗滌烘干的消化管內(nèi),加入催化劑和10ml硫酸。
2、 將消化管分別放入消化架各個孔內(nèi),然后置于消化爐上,開啟抽吸泵水閥,使抽吸泵處于吸氣狀態(tài)。接通電源,在加熱初始階段,需注意觀測,防止試樣因急沸而飛濺。(初化時,電壓調(diào)至180V-200V溫度不宜太高)。
二、 蒸餾
1、 用橡膠管連接NaOH、HO注入接口,冷卻水接口和排水口。
2、 按下蒸汽開關,蒸發(fā)爐內(nèi)水由冷卻水接口通過冷凝管,經(jīng)平穩(wěn)器慢慢流入,由于蒸發(fā)爐水位不斷上升,使電極板之間電流逐步增加,水溫經(jīng)過電熱板加熱而上升,但由于初始時水溫較低,水溫迅速上升,蒸汽尚未能馬上產(chǎn)生,電流急劇增加,造成熔絲管斷裂。待電流表指向5A時即釋放蒸汽開關,待指針回落到零時,再按蒸汽開關,反復幾次,等蒸汽正常噴出,電流表固定在4-5A時,即開始正常蒸餾。
3、 在250ml三角燒瓶中加入2%硼酸50ml和2-3滴混合指示劑,將其套在蒸餾器的接收管上,并且讓管口浸沒在硼酸溶液中。
4、 扳動蒸餾托盤架把需要蒸餾的消化管固定在蒸餾托盤上,通過面板開關分別向消化管注入蒸餾水和氫氧化鈉溶液,然后開啟蒸汽開關,向試管內(nèi)注入蒸汽,進行蒸餾。待接收瓶液面高于150ml時將接收瓶下移,使接收管離開液面,用水沖洗出氣口,繼續(xù)蒸餾半分鐘,然后取下接收瓶,帶滴定。
三、 滴定
用0.1N HCl滴定接收瓶內(nèi)的溶液,滴定溶液由綠色變成淡紫色時為止,記下消耗HCl的毫升數(shù),按下式計算蛋白含量:
式中:V—消耗鹽酸的毫升數(shù)
V—空白試驗時消耗鹽酸的毫升數(shù)
N—鹽酸的當量濃度
0.014—1ml鹽酸的克當量數(shù)
A—固定系數(shù)(6.25,5.7等)
W—試樣重量
(空白測定:用0.1克糖代替樣品或不加樣品作空白測定)
四、 注意事項
1、 消化時若有氣體外溢,加大抽吸泵水的流速。
2、 氫氧化鈉溶液因長期不用,管里容易產(chǎn)生粘固現(xiàn)象,每次工作后把氫氧化鈉外接皮管移入蒸餾水瓶內(nèi),抽洗幾次,待下次使用時,在蒸餾時需排出100ml氫氧化鈉,以防稀釋,影響測定誤差。
3、 每次蒸餾結束,必須迅速取下消化管,防止消化管液體倒吸至蒸發(fā)爐內(nèi)腐蝕電極板。
4、 盛水和氫氧化鈉的容器應低于儀器高度,防止泵停止工作后大氣壓把液體壓入消化管。