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3M快速金黃色葡萄球菌數(shù)測(cè)試片操作以及判讀 |
| 一、測(cè)試金黃色葡萄球菌數(shù) 操作方法 | |
 1、未拆封包請(qǐng)冷藏于≤8℃，并在保存期限內(nèi)使用完。在高溫度的環(huán)境中可能出現(xiàn)冷凝水，最好在拆封前將整包回溫至室溫。 |
  2-3、已開封時(shí)，將封口已膠帶封緊，存放于25℃/濕度50%以下,并于一個(gè)月內(nèi)使用完. 請(qǐng)勿將已開封包冷藏于冰箱 |
 4、使用無菌的容器置入樣品，已備將樣品作10倍或更大倍數(shù)的稀釋。 |
 5、加入適量的無菌稀釋液:Butterfield s phosphate buffer(IDF phosphate buffer,0.0425g/L of KH2PO4 adjusted to pH 7.2),0.1%peptone water ,people saltdiluent (ISO method 6887),saline solution (0.85-0.90%),bisulfite-free letheen broth,或無菌蒸餾水。 不可用buffered peptone water 或buffered 含有citrate ,bisulfite,or thiosulfate ;它們可能抑止菌生長(zhǎng)。 |
 6、攪拌或均質(zhì)樣品。 調(diào)整樣品稀釋液的pH值至6.5－7.5。請(qǐng)以1N NaOH調(diào)整酸性產(chǎn)品pH值，以1N HCI調(diào)整堿性產(chǎn)品。 |
 7、將測(cè)試片放置在平坦的外表面，揭起上層膜。使用吸管將1ml樣品垂直低在測(cè)試片的中央處。 |
 8、小心卷會(huì)上層膜，避免氣泡進(jìn)入。不要讓上層膜直接蓋回。 |
 9、使用壓板放置在上層膜中央處。輕輕的壓下，是樣品液均勻覆蓋于圓形的培養(yǎng)面積上。且勿扭轉(zhuǎn)或滑動(dòng)亞板。拿起亞板，靜置1分鐘以使培養(yǎng)基凝固。 |
 10、測(cè)試片的透明膜朝上可堆疊至10片，培養(yǎng)于35℃＋1℃或37℃＋1℃下，24＋2小時(shí)。 |
 11、培養(yǎng)之后，菌落可能生長(zhǎng)，但在檢測(cè)片上看不到，因?yàn)橹甘緞┦呛诮瘘S色葡萄球菌檢測(cè)反應(yīng)片上。 |
 12、檢測(cè)片移至36℃＋2℃培養(yǎng)箱，培養(yǎng)1－4小時(shí)。注意：如果菌落需要進(jìn)一步測(cè)試，檢測(cè)片培養(yǎng)不要超過一個(gè)小時(shí)。 |
 13、使用無菌鑷子取出圓形的反應(yīng)片，再掀開檢測(cè)片上層膜小心置入反應(yīng)片。在江上層膜放下。 |
 14、為了確定反應(yīng)片與培養(yǎng)膠均勻接觸及避免夾帶任何氣泡，可以使用一個(gè)彎曲的玻璃棒（L玻璃棒）輕壓檢測(cè)片。 |
 15、將已置入反應(yīng)片的金黃測(cè)葡萄球菌檢測(cè)片培養(yǎng)于35℃＋1℃或37℃＋1℃，1－3小時(shí)。 |
 16、可目視或使用菌落計(jì)數(shù)器并可參讀判讀卡計(jì)算菌落數(shù)。 |
 17、菌落可以分散做為進(jìn)一步的鑒定，掀起上層膜，有培養(yǎng)膠上挑起菌落。 |
| 二、測(cè)試金黃色葡萄球菌數(shù) 判讀方法 | |
| 快速金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)測(cè)試片（Petrifilm RSN）由兩部分組成，第一部分是金黃色葡萄球菌培養(yǎng)基片，次檢驗(yàn)片含有修正Baird-Pdker 營(yíng)養(yǎng)物幾一冷水可溶解的膠質(zhì)，第二部分是熱安定核酸酶（TNase）反應(yīng)片，包含有DNA，Toludine RSN-O（甲苯胺籃）及四唑指示劑(Terazolium),此一指示劑有助于菌落的計(jì)數(shù)及確定葡萄球菌熱安定核酸酶的存在.
熱安定核酸酶是一種金黃色葡萄球菌的酵素產(chǎn)物,在高溫下能維持穩(wěn)定, 熱安定核酸酶的檢測(cè)象凝固酶反映一樣,是一種鑒定金黃色葡萄球菌的方法. 在Petrifilm RSN 檢測(cè)片上，熱安定核酸酶反應(yīng)看起來像是粉紅色環(huán)帶包圍著的一個(gè)紅色、或籃子菌落. Petrifilm RSN 檢測(cè)片必須與Petrifilm熱安定核酸酶反應(yīng)片一起使用,單獨(dú)使用將不會(huì)顯示菌落,因?yàn)榫哂休o助計(jì)數(shù)菌落的指示劑是在反應(yīng)片上,而不是在Petrifilm RSN檢測(cè)片上。 |
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 S.aureus count=22本圖片顯示一個(gè)典型的petrifilm RSA檢測(cè)片上的金黃色葡萄球菌的菌落,計(jì)算所有粉紅色環(huán)帶的菌落既是S.aureus,菌落可能是紅色或藍(lán)色. |
 S.aureus count=0圖2顯示一個(gè)置人petrifilm 熱安定核酸酶反應(yīng)片的petrifilm RSA 檢測(cè)片,在這檢測(cè)片上看不到菌落或熱安定核酸酶環(huán)帶. |
 S.aureus count=4熱安定核酸酶反應(yīng)的一種指示劑造成金黃色葡萄球菌呈紅色菌落,第二種指示劑使得熱安定核酸酶環(huán)帶顯示粉紅色. |
 S.aureus count=36因?yàn)橛行┙瘘S色葡萄求菌只生產(chǎn)少量的熱安定核酸酶,所以無論大小計(jì)算所有的Tnase環(huán)帶菌落為金黃色葡萄球菌. Petrifilm RSA 檢測(cè)片上Tnase環(huán)帶的適當(dāng)計(jì)數(shù)范圍大約是15-100個(gè)菌落.計(jì)數(shù)范圍高低端視 金黃色葡萄球菌生產(chǎn)Tnase環(huán)帶量的多寡及其他菌相生長(zhǎng)狀況. |
 S.aureus count = 38有些金黃色葡萄球菌產(chǎn)生大量的熱安定核酸酶.這一類的金黃色葡萄球菌,于最后一階段培養(yǎng)時(shí),只需30分鐘培養(yǎng)既可計(jì)算.因?yàn)橐研纬煽赡繙y(cè)的Tnase環(huán)帶. 注意:圖4與圖5有大約相同的菌落數(shù).至于Tnase環(huán)帶大小的差異,可能來自菌株的不同或最后階段培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)短的差異. |
 Estimated s.aureus count = 150Petrifilm 圖形的生長(zhǎng)面積大約30平方公分.可以 估算方式,先數(shù)三個(gè)方格內(nèi)粉紅色環(huán)帶的數(shù)量,在乘以10,即為所有在圖形培養(yǎng)范圍內(nèi)的菌落數(shù). |
 S.aureus count = TNTC當(dāng)大量的金黃色葡萄球菌出現(xiàn)時(shí),粉紅色Tnase 環(huán)帶可能重疊造成整個(gè)檢測(cè)片變成粉紅色. 圖7顯示一個(gè)檢測(cè)片中,因菌落過多無法計(jì)數(shù)(TNTC).建議進(jìn)一步稀釋樣品來鑒定正確的菌落數(shù). |
 S.aureus count = 3偶爾水化培養(yǎng)基的菌株會(huì)長(zhǎng)在檢測(cè)片上.他們呈不規(guī)則形的紅色菌落,而且周圍無粉紅色Tnase環(huán)帶.亦不視為金黃色菌落但無粉紅色Tnase環(huán)帶,亦不視為金黃色葡萄球菌(如圓圈2). 若有大的食物顆粒存在,反應(yīng)片不易與培養(yǎng)基均勻秘合,易造成圓形范圍邊緣產(chǎn)生氣泡(如圓圈3). |
 S. aureus count = 15食物顆粒是不規(guī)則形狀可能呈紅,藍(lán)或綠色(如圓圈4). 當(dāng)二個(gè)金黃色葡萄球菌生長(zhǎng)的相當(dāng)靠近的時(shí)候,會(huì)導(dǎo)致其Tnase 環(huán)帶.計(jì)數(shù)時(shí),請(qǐng)視為二個(gè)菌落(如圓圈5). |
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