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如何判斷液相色譜儀是否被污染以及攜帶污染類型、發(fā)生原因和減少方法

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2024-09-13
核心提示: 當(dāng)液相色譜儀被污染之后,就會出現(xiàn)數(shù)據(jù)錯誤等問題。今天,我們就和大家一起探討一下,如何判斷液相色譜儀是否被污染以及系
 當(dāng)液相色譜儀被污染之后,就會出現(xiàn)數(shù)據(jù)錯誤等問題。今天,我們就和大家一起探討一下,如何判斷液相色譜儀是否被污染以及系統(tǒng) (HPLC) 中“攜帶污染”(或俗稱“殘留”)發(fā)生的原因和減少的方法。
基線變化基線變化一般不會很有規(guī)律,如果在自動量程下監(jiān)控基線情況,不可能得到原來儀器理想狀態(tài)的有規(guī)律的基線在高頻率上下浮動的變化,而是有時候會得到低頻率變化的峰,看上去很像有東西洗脫出來,并且峰寬比較大,像共洗脫現(xiàn)象似的;漂移不像原來那樣慢慢的變平,而是一直朝一個方向漂,比如向上漂,平衡一天也可能是一直在漂。柱壓變化柱壓變化影響較小,除非是檢測池太臟,堵塞嚴(yán)重,會對柱壓產(chǎn)生小于1000psi的影響(一般的用到光的檢測池也就耐這么高的壓力),但這種情況不會持續(xù)發(fā)生,給你排查的時間有限,堵的時間長了,會爆池,壓力也就沒有影響了。峰面積變化峰面積應(yīng)該是變小。檢測池臟時會有兩種情形影響檢測靈敏度。一方面是基線噪聲變大,從整體上影響信噪比。另一方面,檢測池臟了對于光檢測原理的檢測器來說(UV、PDA、DAD、FLD、ELSD)首先會減弱通過檢測池的光強(qiáng)度,光強(qiáng)度降低了,靈敏度就會下降,相當(dāng)于檢測器光源的能量降低。保留時間有時由于檢測器臟了,系統(tǒng)壓力增加,然后某個接口的地方出現(xiàn)漏液,導(dǎo)致保留時間出現(xiàn)一些變化,不過這種可能性較小。攜帶污染類型、發(fā)生原因和減少方法“攜帶污染”(或俗稱“殘留”)是用來描述一種樣品污染的術(shù)語,它會導(dǎo)致分析物的色譜峰在之后的樣品分析中再次出現(xiàn),而這些分析實(shí)際上并不包含樣品(例如空白樣或純?nèi)軇_@種污染可持續(xù)數(shù)次連續(xù)分析,通常在每次進(jìn)樣后污染量都會減少(這是排除故障時的關(guān)鍵觀察點(diǎn))。如果提供了適當(dāng)?shù)膬x器培訓(xùn),現(xiàn)代高效液相色譜系統(tǒng)的設(shè)計會使攜帶污染現(xiàn)象變得極為罕見,但當(dāng)攜帶現(xiàn)象出現(xiàn)時,污染可能是由于以下原因造成的:(1) 缺乏高效液相色譜維護(hù);(2) 樣品超載,造成色譜柱殘留;(3) 洗滌瓶使用不當(dāng)和/或樣品瓶選擇不當(dāng);(4) 操作員在如何設(shè)置和使用色譜系統(tǒng)方面的培訓(xùn)不足。注:適當(dāng)?shù)牟僮鲉T培訓(xùn)可大大降低污染的機(jī)率,也是最容易被忽視的原因。樣品超載如果注入的樣品濃度過高,使色譜柱超載,那么在分析結(jié)束后很長時間內(nèi),色譜柱仍有可能繼續(xù)滲出樣品。如果沒有定期沖洗和清潔色譜柱,也會導(dǎo)致類似的問題,因?yàn)殡S著時間的推移,保留的物質(zhì)會從色譜柱中釋放出來。要避免這一問題,首先要進(jìn)行載量研究,確定色譜柱上能有效承載多少物質(zhì)。如果采用的是等度方法,需要創(chuàng)建一種清洗方法,使用比您的方法更強(qiáng)的溶劑(通常使用梯度),這樣就能在兩次分析之間洗去任何強(qiáng)保留物質(zhì),因?yàn)椴牧蠒A粼谏V柱上,必須每隔一段時間使用較強(qiáng)的洗滌液將其洗掉。清洗瓶的使用和/或樣品瓶的選擇許多老式自動進(jìn)樣器設(shè)計使用低壓進(jìn)樣器,這些進(jìn)樣器需要單獨(dú)的清洗瓶,因?yàn)樗鼈儾恍枰掷m(xù)清洗。清洗瓶中應(yīng)注入流動相或溶液,以溶解系統(tǒng)中可能殘留的任何物質(zhì)。如果使用的是現(xiàn)代高壓“直通式 ”自動進(jìn)樣器,則很少會出現(xiàn)攜帶污染問題,因?yàn)檫@些現(xiàn)代進(jìn)樣器使用高壓泵將樣品吸入并直接注入流動流路,從而減少了對任何清洗階段的需求。注:對于多次穿刺的小瓶,必須更換隔膜或使用密封時間足夠長的隔膜材料,以減少這種影響。擦拭隔膜針可消除部分污染。這個問題會造成兩種污染。(a)當(dāng)針頭浸入同樣有一個大隔膜開口的樣品瓶(相同或不同的樣品瓶)時,針頭會帶著一些樣品沉積到新的樣品瓶(或樣品瓶的隔膜上)。(b)污染物還可能順著針頭本身流下,在進(jìn)樣時滴到針座上,造成針座或樣本污染。減少針頭外部污染的最簡單的解決方案之一,就是在洗瓶中加入一種溶液,這種溶液經(jīng)過優(yōu)化,可以快速將樣品溶解到溶液中。這聽起來很簡單,但許多色譜分析人員選擇的清洗液根本無法提高洗針的清潔度。例如肽、蛋白質(zhì)、脂肪、油類和/或脂類等樣品可能很麻煩,因?yàn)樗鼈兊娜芙庑钥赡芘c所選的流動相不符;流動相通常是理想的,但在某些情況下卻不起作用。這些清洗瓶必須經(jīng)常更換(只需在系統(tǒng)中設(shè)置多個清洗瓶位置即可)。此外,每次使用清洗瓶時都應(yīng)將瓶蓋關(guān)閉,以減少吸取污染(此步驟至關(guān)重要)。缺乏 HPLC 維護(hù)大多數(shù)自動進(jìn)樣器閥門,依靠旋轉(zhuǎn)密封將樣品從針環(huán)路轉(zhuǎn)移到系統(tǒng)的流路中。這些閥門內(nèi)的部件會磨損,應(yīng)至少每6個月檢查一次,必要時更換。此外,還應(yīng)經(jīng)常檢查針座和針是否有磨損或泄漏的跡象。注:查看進(jìn)樣器是否有泄漏跡象。泄漏總是表明存在問題,應(yīng)立即解決。有泄漏時不要進(jìn)行進(jìn)樣。您的方法和獲得的數(shù)據(jù)將無效。應(yīng)更換任何磨損的部件并測試系統(tǒng)性能。造成樣品攜帶污染的最常見原因之一是:樣品注入閥旋轉(zhuǎn)密封磨損。磨損的密封件會使樣品在兩次進(jìn)樣之間滯留在其空間和凹槽中,導(dǎo)致在隨后的分析中出現(xiàn)樣品色譜峰。此外,緩沖鹽也會滯留在密封件之間,造成泄漏或攜帶污染。例行的 HPLC 維護(hù)以及每天沖洗所有緩沖液/鹽(如適用)可消除這些問題。操作員培訓(xùn)不足良好的色譜分析需要全面了解所使用的硬件和HPLC的基本原理。您必須能夠?qū)ο到y(tǒng)的完整流路和方法開發(fā)中使用的色譜概念進(jìn)行故障排除,通過指導(dǎo),采用合理的步驟來學(xué)習(xí)。
文章來源:網(wǎng)絡(luò)
編輯:songjiajie2010

 
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