外標(biāo)法分為工作曲線法、外標(biāo)一點法。

工作曲線法是用對照物質(zhì)配制一系列濃度的對照品溶液確定工作曲線，求出斜率、截距。在完全相同的條件下，準(zhǔn)確進(jìn)樣與對照品溶液相同體積的樣品溶液，根據(jù)待測組分的信號，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出其濃度，或用回歸方程計算；

外標(biāo)一點法是用一種濃度的對照品溶液對比測定樣品溶液中i 組分的含量。將對照品溶液與樣品溶液在相同條件下多次進(jìn)樣，測得峰面積的平均值，用下式計算樣品中i組分的量。

（1）用標(biāo)準(zhǔn)樣品配制成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)系列，在與欲測組分相同的色譜條件下，等體積準(zhǔn)確量進(jìn)樣，測量各峰的峰面積或峰高，用峰面積或峰高對樣品濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，此標(biāo)準(zhǔn)工作曲線應(yīng)是通過原點的直線。若標(biāo)準(zhǔn)工作曲線不通過原點，說明測定方法存在系統(tǒng)誤差。標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的斜率即為絕對校正因子。

（2）當(dāng)欲測組分含量變化不大，并已知這一組分的大概含量時，也可以不必繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，而用單點校正法，即外標(biāo)一點法。外標(biāo)一點法實際上是利用原點作為標(biāo)準(zhǔn)工作曲線上的另一個點。因此，當(dāng)方法存在系統(tǒng)誤差時（即標(biāo)準(zhǔn)工作曲線不通過原點），單點校正法的誤差較大。因此規(guī)定，y=ax+b（b的絕對值應(yīng)不大于100%響應(yīng)值是y的2%）。

優(yōu)點：繪制好標(biāo)準(zhǔn)工作曲線后測定工作就很簡單了，計算時可直接從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線上讀出含量，這對大量樣品分析十分合適。特別是標(biāo)準(zhǔn)工作曲線繪制后可以使用一段時間，在此段時間內(nèi)可經(jīng)常用一個標(biāo)準(zhǔn)樣品對標(biāo)準(zhǔn)工作曲線進(jìn)行單點校正，以確定該標(biāo)準(zhǔn)工作曲線是否還可使用。

缺點：ÿ次樣品分析的色譜條件（檢測器的響應(yīng)性能，柱溫度，流動相流速及組成，進(jìn)樣量，柱效等）很難完全相同，因此容易出現(xiàn)較大誤差。另外，標(biāo)準(zhǔn)工作曲線繪制時，一般使用欲測組分的標(biāo)準(zhǔn)樣品（或已知準(zhǔn)確含量的樣品），因此對樣品前處理過程中欲測組分的變化無法進(jìn)行補償。

優(yōu)點：進(jìn)樣量的變化，色譜條件的微小變化對內(nèi)標(biāo)法定量結(jié)果的影響不大，特別是在樣品前處理（如濃縮、萃取，衍生化等）前加入內(nèi)標(biāo)物，然后再進(jìn)行前處理時，可部分補償欲測組分在樣品前處理時的損失。若要獲得很高精度的結(jié)果時，可以加入數(shù)種內(nèi)標(biāo)物，以提高定量分析的精度。

缺點：選擇合適的內(nèi)標(biāo)物比較困難，內(nèi)標(biāo)物的稱量要準(zhǔn)確，操作較麻煩。使用內(nèi)標(biāo)法定量時要測量欲測組分和內(nèi)標(biāo)物的兩個峰的峰面積（或峰高），根據(jù)誤差疊加原理，內(nèi)標(biāo)法定量的誤差中，由于峰面積測量引起的誤差是標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量的2-2，但是由于進(jìn)樣量的變化和色譜條件變化引起的誤差，內(nèi)標(biāo)法比標(biāo)準(zhǔn)曲線法要小很多，所以總的來說，內(nèi)標(biāo)法定量比標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量的準(zhǔn)確度和精密度都要好。

1.內(nèi)標(biāo)物應(yīng)是該試樣中不存在的純物質(zhì)；

2.它必須完全溶于試樣中，并與試樣中各組分的色譜峰能完全分離；

3.加入內(nèi)標(biāo)物的量應(yīng)接近于被測組分；

4.色譜峰的λ置應(yīng)與被測組分的色譜峰的λ置相近，或在幾個被測組分色譜峰中間。

“以前做過很多醫(yī)藥、農(nóng)藥中間體的芳香族±代化合物的常量定量分析，û有自動進(jìn)樣器，用外標(biāo)法定量，確實重現(xiàn)性與穩(wěn)定性非常差，結(jié)果經(jīng)常受到搞合成同事的質(zhì)疑。其實，仔細(xì)分析原因不一定就是外標(biāo)法不適合這種定量分析，首先我們的實驗室儀器和手段是否調(diào)整到一種穩(wěn)定而合理的狀態(tài)了，比如，襯管是否潔凈，玻璃棉的λ置是否合適恰當(dāng)（能否使樣品盡可能的汽化）、汽化溫度是否合適、色譜峰形是否對稱（也就是樣品與色譜柱健合相是否匹配）、附近有û有其它色譜峰的干擾、選用什ô進(jìn)樣方式（如快速進(jìn)樣還是熱針進(jìn)樣）等等因素的影響都需要考慮，如果這些因素都考慮了，按照GMP方法驗證對于精密度的要求，同一樣品進(jìn)6針以上的RSD和配制6個樣品的定量結(jié)果RSD都能滿足小于1.5%的要求，那ô這個方法用外標(biāo)法就是完全適用的，但是前面的影響因素是一定要都考慮到的，否則談?wù)撨@個方法是否適用就有失偏頗了。
 

在做過的許多出口產(chǎn)品的定量分析方法當(dāng)中有許多是一些醫(yī)藥公司提供的比較完善而驗證過的方法，內(nèi)標(biāo)與外標(biāo)都有（他們用的都是自動進(jìn)樣）精密度都能滿足RSD小于1.5%的要求，當(dāng)一個方法能夠滿足測試要求的時候，無論內(nèi)標(biāo)外標(biāo)，都是可行的，當(dāng)然有一個分析成本和分析時間的問題，內(nèi)標(biāo)的成本和控制溶液、樣品溶液的配制當(dāng)然要比外標(biāo)要高和麻煩一些了。而有些時候，可能受你實驗室現(xiàn)有儀器和附屬設(shè)備的影響，達(dá)不到一定的要求，而還必須進(jìn)行定量分析，有時外標(biāo)的結(jié)果可能就要差一些，這時，你可能就要考慮用內(nèi)標(biāo)法了，可以排除手動進(jìn)樣的誤差、分流歧視的影響、包括一些δ知因素平行誤差的影響，這時內(nèi)標(biāo)可能就顯示出它的優(yōu)勢來了。”

“¥上已經(jīng)提到當(dāng)做方法驗證的時候，當(dāng)同一樣品配制6個樣品溶液用所選用的外標(biāo)法進(jìn)行定量的時候，RSD都滿足1.5%的要求時，也分為兩種情況，小于1%和大于1%小于1.5%。如果RSD的結(jié)果小于1%，那這個方法就û有什ô可以懷疑的了；如果RSD的結(jié)果大于1%而在1.5%略低一些的范Χ活動時，這個方法的可行性就將受到質(zhì)疑，畢竟這是方法驗證，你就要考慮上面1所提到的影響因素的影響了，如果排除掉以上的影響因素，RSD還是在1.5%附近，就要嘗試內(nèi)標(biāo)了，如果內(nèi)標(biāo)結(jié)果的RSD很好，就證明你的這個方法受實驗條件的影響很大，只能用內(nèi)標(biāo)了，或者干脆將原方法做大的變動，再嘗試用外標(biāo)法測試。”

“對于微量分析，比如農(nóng)藥和獸藥殘留的分析、環(huán)境分析等，根據(jù)不同的限量標(biāo)準(zhǔn)要求對于精密度的要求也比常量分析的要求要寬松的多，RSD有時可以允許達(dá)到10%甚至更高，這時可能外標(biāo)法有更大的應(yīng)用空間�！�

“單從精密度方面去考慮，排除其它成本和效率的因素，個人認(rèn)為還是內(nèi)標(biāo)優(yōu)于外標(biāo)。曾經(jīng)做過一個中間體二氨基丙醇的常量定量分析，以二乙醇胺為內(nèi)標(biāo)，RTX-5amine（堿改性）15m*0.32mm*1.0um色譜柱分析，將配制好的控制溶液（含有內(nèi)標(biāo)物）自動進(jìn)樣器進(jìn)6針，目的物（二氨基丙醇）與內(nèi)標(biāo)物（二乙醇胺）峰面積比率的RSD為0.18%，而只對這六針樣品的目的物峰（二氨基丙醇）面積求RSD，結(jié)果為0.71%，通過這一實例的結(jié)果大家就會發(fā)現(xiàn)到底哪個方法精密度更好了，當(dāng)然是內(nèi)標(biāo)更好了。當(dāng)然這個化合物的檢測方法最后根據(jù)上面的驗證數(shù)據(jù)用內(nèi)標(biāo)和外標(biāo)定量都是可以的，實驗室可以自由選擇。但內(nèi)標(biāo)與外標(biāo)精密度結(jié)果的差異是顯然存在的事實�！�