A=lg(I0/I)=εcb
它說明了,在指定的光程b及被測物的摩爾消光系數(shù)ε(對各物種是特定的常數(shù))下,吸光度A正比于被測溶液濃度c。與同時(shí)在這特定波長下測量不同濃度的已知標(biāo)準(zhǔn)試樣的吸光度所得的工作曲線相比較,可得到定量分析的結(jié)果。
紫外-可見分光光度計(jì)常常是利用熱致輻射的鎢絲燈或鹵鎢燈作為產(chǎn)生可見光區(qū)的光源。而用氫燈或氘燈作為產(chǎn)生紫外區(qū)的光源。光源經(jīng)過一旋轉(zhuǎn)的色散元件(單色器)使復(fù)合光分解成為波長連續(xù)變化的單色光,經(jīng)過盛放著試樣的石英(適用于紫外及可見光區(qū))或玻璃(只適用于可見光區(qū))的樣品吸收池,由檢測系統(tǒng)接收并記錄相應(yīng)波長下透射光的強(qiáng)度的譜圖。
紫外-可見(UV-VIS)分光光度分析法的特點(diǎn)和適用范圍是:
(1)廣泛應(yīng)用于被測物中已知組分的定量分析?梢杂米鞒A浚ǹ藬(shù)量級)的,也可作痕量(100μg·cm-3)的反超痕量(<1μg·cm-3)組分的定量測定。還可同時(shí)測量混合物中多種組分,常用于水中雜質(zhì)分析。常規(guī)檢出限量可低達(dá)10-8克。
(2)準(zhǔn)確度高,儀器設(shè)備較簡單。
(3)適用于有機(jī)物分子部分結(jié)構(gòu)及官能團(tuán)的分析與鑒定,尤其是含有生色基團(tuán)和共軛π鍵體系的有機(jī)物的鑒定,但不能判斷整個(gè)分子的結(jié)構(gòu)。該法也適用于無機(jī)離子,尤其是過渡金屬元素的分析測定。在判別異構(gòu)體結(jié)構(gòu)、過渡金屬配合物結(jié)構(gòu)方面它有其獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)。
(4)由于紫外-可見光譜譜帶寬而少,多數(shù)譜帶特征性不強(qiáng)大,故只能用作定性鑒定的輔助工具。實(shí)際工作中,應(yīng)把它與紅外、核磁共振、質(zhì)譜等配合起來使用,以判定分子結(jié)構(gòu)。