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ELISA試劑盒實驗包被問題解答(一)

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2024-09-05  來源:上海撫生實業(yè)有限公司
核心提示: 在使用ELISA試劑盒進行實驗的時候,需要注意很多問題,比如溫育、顯色、包被等問題。其中,包被是要特別注意的一個問題,直

 

在使用ELISA試劑盒進行實驗的時候,需要注意很多問題,比如溫育、顯色、包被等問題。其中,包被是要特別注意的一個問題,直接關(guān)系到實驗的效果。

一、 包被的方式

將抗原或抗體固定在過程稱為包被(coating)。蛋白質(zhì)與聚苯 烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合的,靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的作用。這種物理吸附是非特異性的,受蛋白質(zhì)的分子量、等電點、濃度等的影響。

大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團,故更易吸附到固相載體表面。不易吸附的非蛋白質(zhì)抗原可用間接包被的抗原經(jīng)固相抗體的親和層析作用,包被在固相上的抗原純度大大提高,因此含雜質(zhì)較多的抗原也可采用捕獲包被法。

親和素生物素即用親和素先包被載體,加入生物素化的DNA,ELISA試劑盒這種包被方法均勻、牢固,已擴大應用于各種抗原物質(zhì)的定量測定。脂類物質(zhì)無法與固相載體結(jié)合,可將其在有機溶劑(例如乙醇)中溶解后加入ELISA板孔中,開蓋置冰箱或冷風吹干,待酒精揮發(fā)后,讓脂質(zhì)自然干固在固相表面。

優(yōu)點:試驗的特異性、敏感性均由此得以改善,重復性亦佳?乖昧可,僅為直接包被的1/10乃至于/100。

編輯:songjiajie2010

 
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