亚洲欧美日韩国产综合网_自拍视频精品一区二区三区_无码激情AV一区二区三区_二天天AV综合网

食品伙伴網(wǎng)服務(wù)號
當(dāng)前位置: 首頁 » 儀器設(shè)備 » 分子生物學(xué)儀器 » 正文

熒光定量PCR實驗中使用的對照分析-內(nèi)標(biāo)

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2024-09-12  來源:上海撫生實業(yè)有限公司
核心提示:3.內(nèi)標(biāo)(Internal Control,IC)內(nèi)標(biāo)是指在同一反應(yīng)管中與靶序列共同擴(kuò)增的一段非靶序列分子。內(nèi)標(biāo)有兩種形式,一種是使用天然樣

3.內(nèi)標(biāo)(Internal Control,IC)

內(nèi)標(biāo)是指在同一反應(yīng)管中與靶序列共同擴(kuò)增的一段非靶序列分子。內(nèi)標(biāo)有兩種形式,一種是使用天然樣品中含有的內(nèi)參基因作為內(nèi)標(biāo),另一種是人工添加的內(nèi)標(biāo)。內(nèi)標(biāo)的最大特點是與靶序列共同擴(kuò)增,而其他的對照都是獨立擴(kuò)增。

3.1 內(nèi)參基因

通常它們在各組織和細(xì)胞中的表達(dá)相對恒定,在檢測基因的表達(dá)水平變化時常用它來做參照物。內(nèi)參基因通常是持家基因(house-keeping gene)因為其表達(dá)水平受環(huán)境因素影響較小,而且在個體各個生長階段的幾乎全部組織中持續(xù)表達(dá)變化很小。常用的內(nèi)參基因包括GAPDH、β-actin(BETA-actin)、18sRNA、B2M、HPRT和TBP等。

內(nèi)參基因的優(yōu)點是與樣品中的靶基因經(jīng)歷全相同的處理程序,可以監(jiān)控采樣,運輸,核酸提取和擴(kuò)增的全部過程。缺點是不同物種,不同生理狀態(tài)下,不同組織中的內(nèi)參基因存在一定的差異。如果樣品類型是口腔液,咽拭子等樣品,內(nèi)參基因的量很低可能導(dǎo)致實驗不成立。如果檢測的是環(huán)境樣品則內(nèi)參基因可能全失效。

3.2人工內(nèi)標(biāo)

添加一種不會干擾靶序列擴(kuò)增的人工合成的內(nèi)標(biāo),F(xiàn)在國外的診斷試劑盒大部分都會將內(nèi)標(biāo)直接添加在反應(yīng)液中與模板一起擴(kuò)增,但是這樣的內(nèi)標(biāo)不能監(jiān)控采樣,運輸和核酸提取的過程。

還有另一種形式的內(nèi)標(biāo),使用人工合成的假病毒,在核酸提取前在每一份樣品中加入等量的內(nèi)標(biāo),這樣就可以監(jiān)控樣品的提取到擴(kuò)增的過程。但是由于是人工添加到樣品中,仍然不能監(jiān)控胞內(nèi)細(xì)菌病毒的釋放情況。

編輯:songjiajie2010

 
分享:
 

 
 
推薦圖文
推薦儀器設(shè)備
點擊排行
 
 
Processed in 0.130 second(s), 18 queries, Memory 0.88 M