蛋白濃度測定的方法有很多,但每種方法都有其特點和局限性,因而需要在了解各種方法的基礎上根據(jù)不同情況選用恰當?shù)姆椒,以滿足不同的要求。例如凱氏定氮法結果精確,但操作復雜,用于大批量樣品的測試則不太合適;Lowry法精確度較高,但是比較費時,且每步的時間要求相對嚴格;Bradford法靈敏簡便,但易受去垢劑的影響;BCA法以其試劑穩(wěn)定,抗干擾能力強,結果穩(wěn)定,靈敏度高而受歡迎。
5. UV吸收法:
原理:利用蛋白質中的芳香族氨基酸(如酪氨酸、色氨酸)在280nm處的吸收峰,測定溶液中蛋白質的含量。
優(yōu)點:操作簡單,無需添加試劑;可同時測定多個樣品。
缺點:靈敏度較低,只能檢測高濃度的蛋白質;對于某些蛋白質(如酶)會產(chǎn)生干擾,導致測定結果不準確。