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一文讀懂CCK-8檢測實(shí)驗(yàn),看完你就會了!

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2024-09-25  來源:細(xì)胞鏟屎官公眾號
核心提示: CCK-8檢測實(shí)驗(yàn)是一種常用的細(xì)胞增殖和毒性檢測方法,通過測量細(xì)胞內(nèi)酶活性的變化來評估細(xì)胞的活力。本文將為您詳細(xì)介紹CCK

 

CCK-8檢測實(shí)驗(yàn)是一種常用的細(xì)胞增殖和毒性檢測方法,通過測量細(xì)胞內(nèi)酶活性的變化來評估細(xì)胞的活力。本文將為您詳細(xì)介紹CCK-8檢測實(shí)驗(yàn)的原理、操作步驟及注意事項(xiàng),幫助您輕松掌握這一實(shí)驗(yàn)技能!

操作方法

1. 實(shí)驗(yàn)前將細(xì)胞接種96孔板,每組鋪5個(gè)平行孔(孔的外圍一圈加PBS,以防邊緣效應(yīng)影響實(shí)驗(yàn)組),在96孔板中配置100μl的細(xì)胞懸液.將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時(shí)。

2. 進(jìn)行CCK-8實(shí)驗(yàn),棄掉孔內(nèi)原有培養(yǎng)基并每孔加入新配制的含有終體積1/10 CCK-8溶液(CCK-8試劑盒)的完全培養(yǎng)基,37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4h(根據(jù)細(xì)胞量決定時(shí)間長短,細(xì)胞越多OD值越大且隨著孵育時(shí)間的延長OD值也會變大,最適OD值應(yīng)保持在2以內(nèi))。

3. 在450nm處測定吸光值。

4. 計(jì)算細(xì)胞增殖率:(實(shí)驗(yàn)組OD - 空白組OD)/(對照組OD - 空白組OD)

注意:

如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話,可在加CCK8之前更換新鮮培養(yǎng)基(除去培養(yǎng)基,并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,然后加入新的培養(yǎng)基),去掉藥物影響。當(dāng)然藥物影響比較小的情況下,可以不更換培養(yǎng)基,直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的空白吸收即可。

活力計(jì)算:

細(xì)胞活力*(%)=[A(加藥)—A(空白)]/[A(0加藥)—A(空白)] ×100

A(加藥):具有細(xì)胞、CCK8溶液和藥物溶液的孔的吸光度

A(空白):具有培養(yǎng)基和CCK8溶液而沒有細(xì)胞的孔的吸光度

A(0加藥):具有細(xì)胞、CCK-8溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度

*細(xì)胞活力:細(xì)胞增殖活力或細(xì)胞毒性活力。

CCK-8 可以用于細(xì)胞增殖和毒性分析.其基本原理為:該試劑中含有WST-8,它在電子載體(1-Methoxy PMS)的作用下被細(xì)胞線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚染料,生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比,因此可以用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析。

注意事項(xiàng)

細(xì)胞接種密度要適中,過低或過高的密度都會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

CCK-8試劑的添加量要適量,過多或過少都會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

培養(yǎng)時(shí)間要適當(dāng),過長或過短的培養(yǎng)時(shí)間都可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果的偏差。

測定吸光度時(shí),要確保酶標(biāo)儀的校準(zhǔn)準(zhǔn)確,以獲得可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

CCK-8檢測實(shí)驗(yàn)是一種簡便、快速、高靈敏度的細(xì)胞活力檢測方法,適用于多種細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)條件。通過掌握實(shí)驗(yàn)原理、操作步驟和注意事項(xiàng),您可以輕松進(jìn)行CCK-8檢測實(shí)驗(yàn),為您的科研工作提供有力支持。

編輯:songjiajie2010

 
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